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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 提取 OD 260/230 值偏低
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zzjj_207 at 2013-07-11 18:50:43
好的，我下次试试这样做
还有那我的胶孔附近的带是什么呢？不是DNA，因为我拍照后发现有带，我又放回去跑了10来分钟，还是没动，所以应该不是DNA，不知道是什么杂质？能不能去除？...

这个就不知道了。
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11楼2013-07-11 19:03:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
zzjj_207: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-15 09:41:57
引用回帖:
10楼: Originally posted by zzjj_207 at 2013-07-11 18:50:43
好的，我下次试试这样做
还有那我的胶孔附近的带是什么呢？不是DNA，因为我拍照后发现有带，我又放回去跑了10来分钟，还是没动，所以应该不是DNA，不知道是什么杂质？能不能去除？...

点样孔处一般是核酸蛋白复合体，分子量很高，电泳一般跑不下来。一般提DNA或者RNA都会有一些这样的产物。主要是蛋白核酸的解离不完全。
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12楼2013-07-11 23:35:50
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zzjj_207: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-15 09:41:26
提示几点：
1.RNA通常用分光光度计定量，测量在260 nm处的吸收值（A260）。通常分光光度计A260的读数要介于0.15-1.0之间才是可靠的，因此RNA提取结束后，要根据大概产量稀释（推荐用10 mM Tris.HCl, pH 7.0稀释）到适当浓度范围，再用分光光度计测量。A260为1相当于RNA的浓度为40 µg/ml。
2.为了检测RNA的纯度，可以测量A260与A280的比值，通常纯RNA的A260/A280为1.9-2.1。
3.提取RNA时的用的所有玻璃制品都应该在240℃烘烤3-4小时。提取RNA时的用的所有旧塑料制品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟，并用DEPC-H2O彻底冲洗后灭菌，也可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。无法用DEPC处理的用具可以用氯仿擦拭若干次，这样通常可以消除RNA酶的活性。
4.RNA样品一旦从生物体中分离后，细胞内的RNA就变得非常不稳定，容易降解。取样后最好用液氮速冻，再放到超低温冰箱中保存。
Good Luck！
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13楼2013-07-11 23:42:33
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
zzjj_207: 金币+2 2013-07-15 09:41:39
还有那我的胶孔附近的带是什么呢？不是DNA，因为我拍照后发现有带，我又放回去跑了10来分钟，还是没动，所以应该不是DNA，不知道是什么杂质？

想知道的话，可以质谱测一下，对比空白的凝胶，走完电泳后，可以将样品连同邻近的凝胶一起挖下来走质谱。
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14楼2013-07-11 23:45:41
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sls19881024

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zzjj_207 at 2013-07-11 18:50:43
好的，我下次试试这样做
还有那我的胶孔附近的带是什么呢？不是DNA，因为我拍照后发现有带，我又放回去跑了10来分钟，还是没动，所以应该不是DNA，不知道是什么杂质？能不能去除？...

亲，我想问一下Bioline的产品好用吗？最近也有人向我们推荐Bioline的产品，价格挺贵的，不知道用后的效果怎么样?
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小松
15楼2015-11-16 19:17:27
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zzjj_207

金虫 (小有名气)
我觉得还不错，挺好用的，我提RNA一直用的这个

发自小木虫IOS客户端
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16楼2015-11-17 07:08:21
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