| 查看: 25152 | 回复: 15 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[求助]
RNA 提取 OD 260/230 值偏低
|
|||||
最近在用Bioline的试剂盒提取植物幼苗（包括根）的RNA。 提取的RNA的条带还可以（见附图），OD260/280都大于2.0， 但是OD260/230却小于1.8，有的甚至0.5~0.6，点样空附近可以看到一条模糊的带，是不是糖和盐类物质？怎么采取补救措施去除？求高手指点？ 图片4.jpg |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
zzjj_207» 猜你喜欢
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有183人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zzjj_207: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-15 09:41:26
感谢参与，应助指数 +1
zzjj_207: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-15 09:41:26
|
提示几点： 1.RNA通常用分光光度计定量，测量在260 nm处的吸收值（A260）。通常分光光度计A260的读数要介于0.15-1.0之间才是可靠的，因此RNA提取结束后，要根据大概产量稀释（推荐用10 mM Tris.HCl, pH 7.0稀释）到适当浓度范围，再用分光光度计测量。A260为1相当于RNA的浓度为40 µg/ml。 2.为了检测RNA的纯度，可以测量A260与A280的比值，通常纯RNA的A260/A280为1.9-2.1。 3.提取RNA时的用的所有玻璃制品都应该在240℃烘烤3-4小时。提取RNA时的用的所有旧塑料制品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟，并用DEPC-H2O彻底冲洗后灭菌，也可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。无法用DEPC处理的用具可以用氯仿擦拭若干次，这样通常可以消除RNA酶的活性。 4.RNA样品一旦从生物体中分离后，细胞内的RNA就变得非常不稳定，容易降解。取样后最好用液氮速冻，再放到超低温冰箱中保存。 Good Luck！ |
13楼2013-07-11 23:42:33
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-07-11 11:30:45
3楼2013-07-11 12:29:19
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
★ ★
kx444555: 金币+2, 热心的版主 2013-07-11 14:44:11
amisking: 回帖置顶 2013-07-11 18:25:25
kx444555: 金币+2, 热心的版主 2013-07-11 14:44:11
amisking: 回帖置顶 2013-07-11 18:25:25
| 我也遇到过这种情况。260/230偏低可能是提取试剂的残留，或者乙醇没挥发干净，我碰到的是后者。当时解决的方法也就是尽量去除乙醇了。异丙醇沉淀RNA之后，加75%乙醇洗，洗完用蓝枪头把乙醇吸走，再短暂离心，用白枪头将残余的乙醇尽量吸干，然后等乙醇充分挥发后再加水溶解RNA。挥发乙醇时注意观察RNA沉淀块，沉淀块由白色变成半透明时乙醇就挥发得差不多了，此时加水比较合适。据说挥发时间太长，RNA水分很少时再溶解会很困难，不过我没遇见过。 |
4楼2013-07-11 12:39:05
100