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yajune

木虫 (职业作家)

[求助] RNA提取问题,急求帮助

用天根的试剂盒提的,提的是斑马鱼胚胎里的,提取出来的样品电泳结果条带正常,但是OD260/280比值不正常,提取当天第一次测时是3,我连续测定几次发现比值会随时间减小,我测到第7次的时候比值已经降到2.1;然后第二天换了一管重新测,还是大于2.5,请问是怎么回事?这个RNA样品是否能用?
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yajune

木虫 (职业作家)

没人在么,求帮助啊,在线等
2楼2013-10-12 09:58:26
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

用什么方法测的260/280?
3楼2013-10-12 10:38:37
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匿名

用户注销 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 应助指数-1, 非应助请不要点击应助按钮,谢谢你的理解与支持 2013-10-12 12:24:39
本帖仅楼主可见
4楼2013-10-12 10:56:18
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yajune

木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-10-12 10:38:37
用什么方法测的260/280?

用的紫外分光光度计,用RNASE-free水较的空白
5楼2013-10-12 10:56:28
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yajune

木虫 (职业作家)

求大神回答啊
6楼2013-10-12 18:36:58
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yajune: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-10-14 08:40:20
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-15 11:08:05
你同一管均一的样品,连续去测,读数都有明显不同。
我觉得首先考虑的应该是这个仪器的问题……
你用水调0后,再去测水,读数稳定么?
把提取的RNA稀释之后,再测稳定么?
如果有条件,用Nanodrop测一下。
7楼2013-10-12 20:24:36
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漂_浮

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yajune: 金币+1, 有帮助, 谢谢 2013-10-14 08:40:56
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-15 11:08:11
直接测的RNA的  ?  RNA 极易降解 多次测量  本来就容易结果不一吧
8楼2013-10-12 21:29:37
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yajune: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-10-14 08:41:06
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-15 11:08:19
260/280貌似应该在1.8-1.9左右,260/230应该在2左右,但是数值不应该太大,连续测定几次数值不同是正常的,应为你稀释之后样品在不同的扩散,所以你读出的数值一直在变化,建议你稀释之后稳定一会,使样品充分混匀,然后在测
9楼2013-10-13 08:56:30
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asr

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-15 11:08:25
即使用Nanodrop,也不准,我们平时测的都在2以上。
可以跑个电泳看看亮度
思想极度邪恶,勿怕勿怪!\(^o^)/~
10楼2013-10-14 23:23:50
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