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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取问题，急求帮助
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yajune

木虫 (职业作家)

[求助] RNA提取问题，急求帮助

用天根的试剂盒提的，提的是斑马鱼胚胎里的，提取出来的样品电泳结果条带正常，但是OD260/280比值不正常，提取当天第一次测时是3，我连续测定几次发现比值会随时间减小，我测到第7次的时候比值已经降到2.1；然后第二天换了一管重新测，还是大于2.5，请问是怎么回事？这个RNA样品是否能用？
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1楼 2013-10-12 08:57:30
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yajune

木虫 (职业作家)
没人在么，求帮助啊，在线等
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2楼2013-10-12 09:58:26
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
用什么方法测的260/280?
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3楼2013-10-12 10:38:37
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 应助指数-1, 非应助请不要点击应助按钮，谢谢你的理解与支持 2013-10-12 12:24:39
本帖仅楼主可见
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4楼2013-10-12 10:56:18
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yajune

木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-10-12 10:38:37
用什么方法测的260/280?

用的紫外分光光度计，用RNASE-free水较的空白
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5楼2013-10-12 10:56:28
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yajune

木虫 (职业作家)
求大神回答啊
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6楼2013-10-12 18:36:58
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yajune: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-10-14 08:40:20
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-15 11:08:05
你同一管均一的样品，连续去测，读数都有明显不同。
我觉得首先考虑的应该是这个仪器的问题……
你用水调0后，再去测水，读数稳定么？
把提取的RNA稀释之后，再测稳定么？
如果有条件，用Nanodrop测一下。
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7楼2013-10-12 20:24:36
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漂_浮

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yajune: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2013-10-14 08:40:56
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-15 11:08:11
直接测的RNA的  ？  RNA 极易降解 多次测量  本来就容易结果不一吧
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8楼2013-10-12 21:29:37
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yajune: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-10-14 08:41:06
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-15 11:08:19
260/280貌似应该在1.8-1.9左右，260/230应该在2左右，但是数值不应该太大，连续测定几次数值不同是正常的，应为你稀释之后样品在不同的扩散，所以你读出的数值一直在变化，建议你稀释之后稳定一会，使样品充分混匀，然后在测
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9楼2013-10-13 08:56:30
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asr

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-15 11:08:25
即使用Nanodrop，也不准，我们平时测的都在2以上。
可以跑个电泳看看亮度
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思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~
10楼2013-10-14 23:23:50
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