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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】RNA降解问题求赐教
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钟心碧

金虫 (小有名气)

心碧

[交流] 【求助/交流】RNA降解问题求赐教已有14人参与

提取的RNA老是降解，在其中如果加入Rnase  inhibitors可以放多久呢？请各位大侠赐教！
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灵魂是否存在
1楼2010-12-31 10:21:49
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5):good 2010-12-31 14:44:00
RNA是很容易降解的
首先要解决为什么RNA降解的问题
1.提RNA的时候要勤换手套，代口罩。。。注意环境中RNA酶的污染
2.提RNA动作要快，整个过程越快越好
3.回融的时候注意点别污染RNA酶
4.提取完后尽快-80度保存，尽快做RT-PCR成cDNA -20度保存。
5.RNA中加Rnase  inhibitors后应该还是在-80度保存。保存时间倒是我们试过快一年半的RNA（-80度保存），倒是还能用。
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
2楼2010-12-31 11:54:01
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jerry110

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意楼上的观点，我也好好学学
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3楼2010-12-31 12:18:36
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-31 17:09:12
最好一、二天内做掉实验，即使没有RNA酶，RNA本身也不稳定。
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4楼2010-12-31 15:18:20
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-31 17:09:06
一切都要注意灭菌，ranase灭火，操作中时刻注意操作规范性！！！！
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但愿人长久
5楼2010-12-31 15:33:05
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钟心碧

金虫 (小有名气)

心碧
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5):欢迎多发帖交流。 2010-12-31 20:34:57
第一次发帖，得到这么多朋友的回复，真的好感动！谢谢你们的意见，我再请教下，是不是就算加了RNase inhibitor，RNA还是会降解，我记得一个博士给我讲过，她说就算放了抑制剂，也最好只放一个星期
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灵魂是否存在
6楼2010-12-31 20:10:52
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夜舞龙

至尊木虫 (知名作家)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2):鼓励交流 2011-01-01 08:51:05
我们的RNA放很长时间也没事。如果实在找不到降解的原因就把RNA重悬于乙醇中保存，这样可以保存较长时间。用的时候再重新溶解。
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7楼2010-12-31 22:51:58
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2011-01-04 18:32:35
楼上正解，根据我的实验结果。RNA处理得当没那么容易降解。1个月内使用的RNA我都是放在-20。 降解主要还是发生在提取的时候，你可以看看我的一篇帖子的总结。
(哥提的不是RNA，是多糖)。RNA酶也是酶，也有作用的条件，没那么神，搞得什么条件下都能降解RNA似的。
不过，我的习惯是提好RNA立刻使用，下一步实验不拖。要不就不提，一提后面实验一起做了。
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8楼2011-01-02 14:26:40
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钟心碧

金虫 (小有名气)

心碧
谢谢赐教
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灵魂是否存在
9楼2011-01-04 16:13:44
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smilefish06

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-11 21:27:45
一般情况下提取好的RNA放在-80度冰箱保存，能放半年吧，其实还是看提取过程中降解的厉害不厉害，提取的整个过程严格操作，还有跑电泳时电泳槽、制胶板梳子等要好好处理，不然可能提的还好，结果跑胶跑不好~
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做自己
10楼2011-01-11 14:56:42
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