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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RNA在跑琼脂糖凝胶电泳过程中会降解吗
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】RNA在跑琼脂糖凝胶电泳过程中会降解吗

很困惑这个问题 总是怀疑RNA在跑琼脂糖凝胶电泳过程中会降解，如果会降解的话，应该注意哪些细节避免降解呢？
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1楼2011-01-04 15:46:03
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duanming123

木虫 (正式写手)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-05 09:29:20
在变性胶中跑不会降解，加上甲醛
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2楼2011-01-04 16:06:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1):正解~~~鼓励积极参与~~~ 2011-01-04 18:31:44
普通琼脂糖胶，会
不过，不怕啦，就降解那么一点点，鸭梨不大
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3楼2011-01-04 16:11:15
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gagalady

新虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
同意楼上的说法
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4楼2011-01-04 16:15:08
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hyw1989960

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
一般不影响大局，跑就行
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5楼2011-01-04 16:33:45
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32531400

木虫 (知名作家)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
同意一楼的····

[ Last edited by 32531400 on 2011-1-4 at 16:47 ]
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6楼2011-01-04 16:38:14
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randomqd

木虫 (小有名气)

电泳缓冲液里面EDTA之流很多

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
抑制酶活性的。。。不会降解，表达压力不大。
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7楼2011-01-04 16:38:18
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jerry110

新虫 (小有名气)
会降解，但影响不大
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8楼2011-01-04 18:05:46
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
点样和制胶有什么要注意的吗？ 是否需要在超净工作台进行
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9楼2011-01-04 19:44:53
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小白3521

金虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
加大电压，时间短一点，降解一点点没问题的
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10楼2011-01-04 19:46:43
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-04 16:11:15:
普通琼脂糖胶，会
不过，不怕啦，就降解那么一点点，鸭梨不大

点样和制胶有什么要注意的吗？ 是否需要在超净工作台进行

[ Last edited by xnbioinfor on 2011-1-4 at 19:55 ]
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11楼2011-01-04 19:51:43
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gagalady at 2011-01-04 16:15:08:
同意楼上的说法

点样和制胶有什么要注意的吗？ 是否需要在超净工作台进行

[ Last edited by xnbioinfor on 2011-1-4 at 19:55 ]
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12楼2011-01-04 19:52:03
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2011-01-04 19:46:43:
加大电压，时间短一点，降解一点点没问题的

点样和制胶有什么要注意的吗？ 是否需要在超净工作台进行
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13楼2011-01-04 19:55:09
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lpfxmc

木虫 (初入文坛)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-05 09:29:56
普通琼脂糖胶跑会降解一点，不过不影响大局。点样和制胶没必要在超净工作台进行的，点样是最好用DEPC处理过的枪头从提取的总RNA管中取样，胶最好现配现用，电泳液更换成新的更好。做到以上足矣，但前提是保证前面提取的RNA没问题呵呵
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14楼2011-01-04 20:06:36
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-05 09:30:13
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-04 19:51:43:

点样和制胶有什么要注意的吗？ 是否需要在超净工作台进行

[ Last edited by xnbioinfor on 2011-1-4 at 19:55 ]

没有必要
如果你想做杂交或者回收，就最好跑变性胶，器具也注意处理
但如果只是跑一下看看RNA质量有没有提好的话，根本没必要这么复杂
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15楼2011-01-04 20:38:35
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321wangke321

金虫 (正式写手)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-05 09:30:30
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-04 19:55:09:

点样和制胶有什么要注意的吗？ 是否需要在超净工作台进行

有点降解，影响不大，最好在10V/m下电泳，减少降解。也可以在电泳10min看下，如果没有跑开，继续跑。。。
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16楼2011-01-04 20:41:12
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翱宇

禁虫 (正式写手)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流 2011-01-05 09:30:41
假如只是看RNA的质量而跑胶，其实没有这么复杂。在一个封口膜上加几ulDEPC水，然后加等量的RNA loadingbuffer，在取1ulRNA，加至二者之间，用移液器将两者混匀，加样跑胶就行。
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17楼2011-01-04 22:31:57
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小白3521

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-04 19:55:09:

点样和制胶有什么要注意的吗？ 是否需要在超净工作台进行

不需要超净台，而且点样和制胶貌似都不是最重要吧，提的RNA没问题，跑电泳怎么的都不会给你降解完的，关键还是提取
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18楼2011-01-05 09:09:42
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huizipinggon

铜虫 (初入文坛)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
问题不大，很快就能跑完了，不会降解多少的
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19楼2011-01-05 09:11:59
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DH5a

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
在变性胶中跑不会降解，加上甲醛，
一般琼脂糖凝胶也可以。
溶液要新配
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20楼2011-01-05 10:59:22
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gagalady

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-04 19:52:03:

点样和制胶有什么要注意的吗？ 是否需要在超净工作台进行

[ Last edited by xnbioinfor on 2011-1-4 at 19:55 ]

超净台没这个必要吧，就是外界就可以了，降解的那一点点，可以忽略不计的
点样之前要把样品70度水浴变性吧，然后迅速冰上，加buffer就可以跑样咯
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21楼2011-01-06 19:30:35
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gagalady at 2011-01-06 19:30:35:

超净台没这个必要吧，就是外界就可以了，降解的那一点点，可以忽略不计的
点样之前要把样品70度水浴变性吧，然后迅速冰上，加buffer就可以跑样咯

70度水浴多长时间，这么高的温度，不会造成RNA降解吗？ RNA不是要一直放在冰上吗
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22楼2011-01-07 23:09:39
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zhangtao0502

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意一楼的····

本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2764454&fpage=1
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23楼2011-01-07 23:25:27
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gagalady

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-07 23:09:39:



70度水浴多长时间，这么高的温度，不会造成RNA降解吗？ RNA不是要一直放在冰上吗

哦  我经常是这样做的：提出的RNA，用40微升的DEPC水溶解，从中吸取1微升出来再加10微升DEPC水，将这10微升70度热变性5分钟，立刻冰上，吸取5微升上样电泳
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24楼2011-01-08 16:46:27
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
25楼2011-01-08 16:54:47
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wangchunling

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lpfxmc at 2011-01-04 20:06:36:
普通琼脂糖胶跑会降解一点，不过不影响大局。点样和制胶没必要在超净工作台进行的，点样是最好用DEPC处理过的枪头从提取的总RNA管中取样，胶最好现配现用，电泳液更换成新的更好。做到以上足矣，但前提是保证前面 ...

学习了
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26楼2011-01-08 17:43:13
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lcf0920

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼上的高手，能把您70度热变性后的电泳图传一张上来让我们学习学习吗？多谢！
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27楼2014-03-22 15:13:31
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lcf0920

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
24楼: Originally posted by gagalady at 2011-01-08 16:46:27
哦  我经常是这样做的：提出的RNA，用40微升的DEPC水溶解，从中吸取1微升出来再加10微升DEPC水，将这10微升70度热变性5分钟，立刻冰上，吸取5微升上样电泳...

楼上的高手，能把您70度热变性后的电泳图传一张上来让我们学习学习吗？多谢！
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28楼2014-03-22 15:15:11
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