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木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】RNA琼脂糖凝胶的问题

给位虫友，本人刚涉足分子方面，有很多不懂，特在此请教高人
我们实验室跑DNA和RNA的琼脂糖凝胶时，我们实验室都不加上样缓冲液，直接是RNA样品1ul再用去离子水补齐至10ul，上样缓冲液是单独点一个孔，想问一下，这么做和资料上说的样品中加入上样缓冲液效果一样么，还有为什么用水补齐，直接加样不可以么？还有再跑RNA电泳时我们加的是DNA loading buffer而不是RNA loading buffer 来观测跑胶情况，这样也可以？
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1楼 2011-03-17 15:28:15
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-17 20:00:27
咖啡加点糖(金币+1): 2011-03-29 09:05:45
你说的上样缓冲液单独点一个孔是什么意思，和样品分开的吗？这样倒是没见过，难道你们用的是商业胶条，还是你们用前染或者后染？
样品加入缓冲液是为了把药品沉降到点样孔底部，用水补足是为了好点样，体积不至于太小而飘散到电泳液中，但是分开加loading的，我不知道loading还有什么作用，好看吗？希望楼主搞清楚了大家一起学习
RNA电泳我们一向用DNA Loading，只要是新开封的，上面标上RNA专用就可以了，然后每次用的时候要采用处理过的RNA枪头，电泳液最好换过，这样就不会有什么问题了，而且一般RNA loading里面都有EB，不用为好
好运
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2楼2011-03-17 16:25:42
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jerry110

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励新虫积极参与交流~~ 2011-03-17 22:04:41
loading和样品混了显蓝色，你们是不是为了省loading还是为了省事，就点一个，我觉得点一个是不是为了显示条带大致跑的位置，确定合适停止电泳！
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3楼2011-03-17 19:43:08
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木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-03-17 16:25:42:
你说的上样缓冲液单独点一个孔是什么意思，和样品分开的吗？这样倒是没见过，难道你们用的是商业胶条，还是你们用前染或者后染？
样品加入缓冲液是为了把药品沉降到点样孔底部，用水补足是为了好点样，体积不至于 ...

是和样品分开的，提完RNA后要跑胶看起是否会降解或者其降解程度，我们实验室的做法是：取1ul的样用去离子水补齐10ul然后就点样，最后在另一个未点样的孔里点上5ul的DNA loading buffer，然后就跑胶了！就是这样，最近看着方面的资料，发现大家都不是这么做的，所以很不解，难道单纯只是为了做个标志，看跑到一定位置就停电泳？
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4楼2011-03-17 20:06:42
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木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jerry110 at 2011-03-17 19:43:08:
loading和样品混了显蓝色，你们是不是为了省loading还是为了省事，就点一个，我觉得点一个是不是为了显示条带大致跑的位置，确定合适停止电泳！

其实我也很想是这样，要不然呢？呵呵
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5楼2011-03-17 20:10:19
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piggpi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jerry110 at 2011-03-17 19:43:08:
loading和样品混了显蓝色，你们是不是为了省loading还是为了省事，就点一个，我觉得点一个是不是为了显示条带大致跑的位置，确定合适停止电泳！

同意这个说法。。。。
这种做法还真是少见，后染有吗？楼主可以发张图片比较直观
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6楼2011-03-17 21:56:26
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zgb1982

木虫 (正式写手)
呵呵，还真是第一次听说呢。RNA电泳不用MARKER的吗
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7楼2011-03-17 22:24:38
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木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by piggpi at 2011-03-17 21:56:26:
同意这个说法。。。。
这种做法还真是少见，后染有吗？楼主可以发张图片比较直观

没有，跑完直接在紫外下照相！呵呵，我其实也很不解这种做法
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8楼2011-03-17 22:28:42
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木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2011-03-17 22:24:38:
呵呵，还真是第一次听说呢。RNA电泳不用MARKER的吗

我确定，我们没用！呵呵
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9楼2011-03-17 22:34:40
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另一个天堂

金虫 (小有名气)
咖啡加点糖(金币+1): 2011-03-29 09:05:22
RNA电泳时我们加的是DNA loading buffer而不是RNA loading buffer 来观测跑胶情况？？？这个问题，我们实验室一般都用6 x DNA loading buffer。至于前面的问题，我到没听说过
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10楼2011-03-28 16:07:00
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