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木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】RNA琼脂糖凝胶的问题

给位虫友,本人刚涉足分子方面,有很多不懂,特在此请教高人
我们实验室跑DNA和RNA的琼脂糖凝胶时,我们实验室都不加上样缓冲液,直接是RNA样品1ul再用去离子水补齐至10ul,上样缓冲液是单独点一个孔,想问一下,这么做和资料上说的样品中加入上样缓冲液效果一样么,还有为什么用水补齐,直接加样不可以么?还有再跑RNA电泳时我们加的是DNA loading buffer而不是RNA loading buffer 来观测跑胶情况,这样也可以?
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木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-03-17 16:25:42:
你说的上样缓冲液单独点一个孔是什么意思,和样品分开的吗?这样倒是没见过,难道你们用的是商业胶条,还是你们用前染或者后染?
样品加入缓冲液是为了把药品沉降到点样孔底部,用水补足是为了好点样,体积不至于 ...

是和样品分开的,提完RNA后要跑胶看起是否会降解或者其降解程度,我们实验室的做法是:取1ul的样用去离子水补齐10ul然后就点样,最后在另一个未点样的孔里点上5ul的DNA loading buffer,然后就跑胶了!就是这样,最近看着方面的资料,发现大家都不是这么做的,所以很不解,难道单纯只是为了做个标志,看跑到一定位置就停电泳?
4楼2011-03-17 20:06:42
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yabxxh

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-17 20:00:27
咖啡加点糖(金币+1): 2011-03-29 09:05:45
你说的上样缓冲液单独点一个孔是什么意思,和样品分开的吗?这样倒是没见过,难道你们用的是商业胶条,还是你们用前染或者后染?
样品加入缓冲液是为了把药品沉降到点样孔底部,用水补足是为了好点样,体积不至于太小而飘散到电泳液中,但是分开加loading的,我不知道loading还有什么作用,好看吗?希望楼主搞清楚了大家一起学习
RNA电泳我们一向用DNA Loading,只要是新开封的,上面标上RNA专用就可以了,然后每次用的时候要采用处理过的RNA枪头,电泳液最好换过,这样就不会有什么问题了,而且一般RNA loading里面都有EB,不用为好
好运
2楼2011-03-17 16:25:42
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jerry110

新虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励新虫积极参与交流~~ 2011-03-17 22:04:41
loading和样品混了显蓝色,你们是不是为了省loading还是为了省事,就点一个,我觉得点一个是不是为了显示条带大致跑的位置,确定合适停止电泳!
3楼2011-03-17 19:43:08
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木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by jerry110 at 2011-03-17 19:43:08:
loading和样品混了显蓝色,你们是不是为了省loading还是为了省事,就点一个,我觉得点一个是不是为了显示条带大致跑的位置,确定合适停止电泳!

其实我也很想是这样,要不然呢?呵呵
5楼2011-03-17 20:10:19
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