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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】RNA降解
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RNA降解

提RNA后，测量浓度，都很低，在100-200ng/ul之间。跑胶发现RNA拖尾很严重。提取方法都是QIAGEN的盒子提的，个人认为提取过程不是问题。回想可能犯的错误，唯一能想出来的就是洗研钵的时候没有带手套，研钵清洗完后就直接用了。想问一下，这个是不是造成RNA降解的主要原因？
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1楼 2011-03-25 04:22:41
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木偶娃娃

木虫 (正式写手)
研钵清洗完是怎么处理的？ 不是要高温180°以上8个小时吗？
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2楼2011-03-25 09:34:12
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yabxxh

木虫 (正式写手)
啥？洗完研钵就直接用了？你不高温处理过夜，也得象征性的用酒精点燃一会啊，这个降解还是很自然的
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3楼2011-03-25 09:45:23
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szylnl

银虫 (小有名气)
gdongli8325(金币+3): 2011-03-25 15:34:01
RNA的降解有两方面的原因，
1 外界RNA酶 2 菌体内部的RNA酶
外界的酶可以通过严谨的操作来去除，你说研钵的问题，有可能，可以再做一次，注意一下这个问题。 如果还是降解，那就要从内部的RNA酶方面来考虑，一般的试剂盒都会要求样品的量不能超过多少，你要注意自己样品的量 不能大于试剂盒上所要求的
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4楼2011-03-25 14:38:13
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randomqd

木虫 (小有名气)

还有可能是你电泳的问题

gdongli8325(金币+3): 2011-04-26 00:31:08
提的没问题。。。电泳没跑好也是有可能的，建议做个对照
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5楼2011-03-25 16:34:14
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-03-25 22:58:08
QIAGEN的盒子基本都是室温做的
对操作要求就要个稍微高点了
不知道你的是不是。。。。。

室温下提取RNA是特别容易降解的，所以各方面都要很注意
研钵的处理是挺注意的，
没事，下次注意点就行
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6楼2011-03-25 17:02:48
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-03-25 22:58:17
你研钵不用180度 烘过夜 也就算了   好歹酒精烧一遍啊   没烧也就算了， 好歹拿除rna酶的水洗一遍啊。   磨完就降解完了
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7楼2011-03-25 17:31:58
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lzh860801

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
看天(金币+3): 鼓励交流 2011-03-25 22:58:28
gdongli8325(金币+2): 2011-04-26 00:31:57
不知道LZ做的是什么材料啊，
就我自己做植物的来说，研钵洗完后不经过什么处理直接研磨是绝对没问题的，
做植物材料的时候一般都用液氮研磨，这个时候RNA根本就不会出来，RNA降解关键还是后续操作的原因
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8楼2011-03-25 21:58:25
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