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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】RNA降解

提RNA后,测量浓度,都很低,在100-200ng/ul之间。跑胶发现RNA拖尾很严重。提取方法都是QIAGEN的盒子提的,个人认为提取过程不是问题。回想可能犯的错误,唯一能想出来的就是洗研钵的时候没有带手套,研钵清洗完后就直接用了。想问一下,这个是不是造成RNA降解的主要原因?
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木偶娃娃

木虫 (正式写手)


研钵清洗完是怎么处理的? 不是要高温180°以上8个小时吗?
2楼2011-03-25 09:34:12
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yabxxh

木虫 (正式写手)


啥?洗完研钵就直接用了?你不高温处理过夜,也得象征性的用酒精点燃一会啊,这个降解还是很自然的
3楼2011-03-25 09:45:23
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szylnl

银虫 (小有名气)


gdongli8325(金币+3): 2011-03-25 15:34:01
RNA的降解有两方面的原因,
1 外界RNA酶 2 菌体内部的RNA酶
外界的酶可以通过严谨的操作来去除,你说研钵的问题,有可能,可以再做一次,注意一下这个问题。 如果还是降解,那就要从内部的RNA酶方面来考虑,一般的试剂盒都会要求样品的量不能超过多少,你要注意自己样品的量 不能大于试剂盒上所要求的
4楼2011-03-25 14:38:13
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randomqd

木虫 (小有名气)


还有可能是你电泳的问题

gdongli8325(金币+3): 2011-04-26 00:31:08
提的没问题。。。电泳没跑好也是有可能的,建议做个对照
5楼2011-03-25 16:34:14
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★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-03-25 22:58:08
QIAGEN的盒子基本都是室温做的
对操作要求就要个稍微高点了
不知道你的是不是。。。。。

室温下提取RNA是特别容易降解的,所以各方面都要很注意
研钵的处理是挺注意的,
没事,下次注意点就行
6楼2011-03-25 17:02:48
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★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-03-25 22:58:17
你研钵不用180度 烘过夜 也就算了   好歹酒精烧一遍啊   没烧也就算了, 好歹拿除rna酶的水洗一遍啊。   磨完就降解完了
7楼2011-03-25 17:31:58
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lzh860801

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
看天(金币+3): 鼓励交流 2011-03-25 22:58:28
gdongli8325(金币+2): 2011-04-26 00:31:57
不知道LZ做的是什么材料啊,
就我自己做植物的来说,研钵洗完后不经过什么处理直接研磨是绝对没问题的,
做植物材料的时候一般都用液氮研磨,这个时候RNA根本就不会出来,RNA降解关键还是后续操作的原因
8楼2011-03-25 21:58:25
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