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cjzyfx

木虫 (正式写手)

[求助] RNA 提取的一些问题,请大家帮忙回答

1 RNA提取的时候怎么样有效的避免DNA的污染?
2 RNA提取后在-20放置,可保存多久?
3 大家用的trizol是自己配的还是买的?
谢谢啊
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虔诚的求学

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2012-02-15 22:25:01
同意5楼观点,逆转录成cDNA再保存方便一点,有条件的话当然是买现成的,RNA酶处理过的枪头,trizol的话目的有二,一是抑制RNA酶的活性,二是使蛋白质变性并溶解,里面成分的量会对效果有影响,而且既然是能使蛋白变性的东西,对人体也是有毒的,所以能买尽量买吧。
8楼2012-02-15 11:40:30
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+3, MolEPI+1): 鼓励发帖交流! 2012-02-14 19:55:16
cjzyfx(金币+1): ★★★★★最佳答案 谢谢,很详细 2012-02-15 18:03:48
1、在提取过程增加DNase消化步骤。除使用酶消化外的方法去DNA都不是很彻底。视后续实验而定。
2、如有条件最好放-80保存。主要担心是如果提得不纯(有杂质或未完全灭活的RNase)在-20度保存过程中降解。且这个保存时间跟物种、提取方法等有关。尝试过有些物种的RNA放-20度保存一个月后出现降解的情况(未知是提得不纯或物种原因)
3、实验要求不高可以自己配点Trizol来提,如果重要的实验建议还是购买invitrogen的。
伟大航线....
2楼2012-02-14 17:49:20
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muzihai

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流! 2012-02-14 19:55:24
我之前提取过RNA,鼠肺组织的,关键是避免污染,所用TRIZOL买的是天根试剂公司的,感觉还可以,当然跟你的提取方法还有所用材料有关。提完最好放-80保存,可以存放久一点。至于用DNA酶处理我没有使用,提取质量还可以。
没有过不去的事情,只有过不去的心情!
3楼2012-02-14 18:19:59
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paco120

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励 2012-02-15 22:23:57
在提取RNA时最好所用的所有器械都要经过DEPC水过夜处理,实验平台和仪器不能和做NDA的混用,最好要有专用的RNA操作实验平台。
4楼2012-02-14 18:23:33
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