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可可-LZW

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1505609
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[求助] 细菌RNA提取后跑电泳出现一条暗带和在泳道中弥散都是什么原因？

之前提取细菌的RNA都能看到3条条带，但是前几次提取后跑胶，只在2000以下的地方有比较宽的黑色条带，没有亮的条带；这几天提取后能看见有亮的在泳道中，并且是maker跑得范围内，但是呈弥散状态，看不见是一条条的条带，OD260/OD280为1.3-1.5，浓度在280-460ug/ml（如果要做后续的实验，需要500ug/ml以上，有什么方法增大RNA的浓度吗？），有人说是蛋白或酚污染，但是经过这么多次的提取，该注意的应该还挺小心的，并且多次出现这两种情况，应该不是偶然，但是现在就是找不到原因了，希望有类似经历的大侠给予指点！提RNA提不出来，还找不到原因的痛苦你懂的！多谢各位了！

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1楼 2011-11-23 10:07:52

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longrna

新虫 (正式写手)

MolEPI: 7
应助: 75 (初中生)
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虫号: 1473815
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性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-11-24 22:04:21
可可-LZW(金币+1): Thank you ~ 2011-11-25 10:12:16

引用回帖:

6楼: Originally posted by 可可-LZW at 2011-11-24 10:51:00:
我是用试剂盒里的柱子吸附再用乙醇和异丙醇反复洗，在操作过程中看不到沉淀的，因为原来是能够提取出来的，所以我觉得应该不是方法的问题。还有，如果说用少量的水溶解指的是多少呢？谢谢你了~

什么叫用柱子吸附再用乙醇和异丙醇洗？？？一般用试剂盒的柱子吸附不是试剂盒本身有洗液的吗？

原来提得出来现在不一定提的出来。
用少量的水溶解指的是：
就是说你得到一团在管底的RNA沉淀，用75%乙醇洗过然后干燥，你可以加入1ml DEPC水溶解该团沉淀，假设得到10ng/ul的RNA 。而你也可以加入10ul DEPC水溶解该团沉淀，得到的是1000ng/ul 的RNA，视你所需浓度而定。 you like