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鲲鹏展翅

新虫 (初入文坛)

[求助] 昆虫RNA 提取!电泳图,看不懂!请高手指点!

用trizol法 提取小菜蛾体内RNA ,marker是2000bp的!跑出来的电泳,不知道什么东西? 除了什么原因?
(本实验室无分子实验经验,本人从0开始!悲催的!啥也不懂啊!)



请各位高手指点!



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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

【答案】应助回帖

鲲鹏展翅(金币+1): 非常感谢您帮助 2011-10-31 12:20:48
RNA降解了,提取的器皿要用DEPC水浸泡,玻璃和金属器皿200度高温2小时处理。耗材买RNase free的
2楼2011-10-31 08:29:54
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫


silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-11-17 12:17:03
论坛里关于RNA提取的帖子:
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3212737&fpage=1
3楼2011-10-31 08:34:37
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独自干杯

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:17:17
降解了,提取温度也应该低一些,提取用具要用DEPC水泡,提取速度要快。
4楼2011-10-31 10:03:30
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鲲鹏展翅

新虫 (初入文坛)

谢谢各位帮助!
5楼2011-10-31 12:22:02
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447585565

木虫 (正式写手)

降解的很厉害~~!
6楼2011-10-31 16:27:21
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)

都已经降解啦 所有东西都要在无RANase条件下进行
7楼2011-11-05 14:34:24
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longrna

新虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
silicare(金币+4): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:17:53
是否为普通琼脂糖电泳?
如为普通的琼脂糖凝胶电泳(检测RNA)可以不用跑那么久。以下为我的电泳条件:(最好用RNA专用的电泳槽,新配电泳液。)
上样量:小孔约200ng(中孔可上500-1000ng)1.5% gel, 约7-8V/cm,电泳15-20min(溴芬兰跑离孔约2cm)
EB染色5min。

提取过程严格按RNA操作要求操作。东西肯定要干净这个不用说的了,另外注意一要快,二要低温! 可取些动物肝脏多操作几次练练手。
伟大航线....
8楼2011-11-10 20:29:26
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cyz20050505

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
silicare(金币+3): 谢谢参与 2011-11-17 12:18:15
先用液氮研磨组织,组织别太多,研磨充分后(期间要一直有液氮保持低温)将组织粉末连同未挥发完的液氮一并倒入玻璃匀浆器(预习加入troznl试剂,并置于冰上),然后直接磨其他组织,待化开后,开始匀浆,匀浆充分后就可以开始提取了。玻璃和铁制器皿200度干烤3个小时,有机试剂不用处理,水必须是DEPC处理的水,EP管和枪头最后买公司生产的RNase-free的管,没有的话,也用DEPC处理。电泳变性不变性没有影响,我甚至用普通的EP管装RNA,也没见它降解。根据我个人经验,前期研磨和匀浆是至关重要的一步。操作带手套,口罩,穿大褂。
9楼2011-11-17 10:48:31
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wansanlian

金虫 (小有名气)

我们也是从0过来的,没事,你慢慢做的话应该会好了,我之前做的时候跑的也跟你的第一个图一样的,但是第二个图的时候你再少加点量看下会不会看的清,如果条带很靠后,基本上都是己经降解了的呢~一般28S会在1.5K左右的位置
乱花渐欲迷人眼
10楼2012-05-09 13:15:51
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