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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于RNA反转定量
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nininini

银虫 (小有名气)

[求助] 关于RNA反转定量

我的RNA样品有些降解，由电泳及分光光度计两种方法计量RNA浓度，那么在反转时是应该以OD260计算呢，还是以电泳图谱分析的23s、16s条带的亮度来定量呢？两者计算结果能差十几倍呢，请高手指点。
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1楼 2011-08-23 12:08:28
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rioarsenal

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
nininini(金币+2): 2011-08-23 14:50:46
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-23 17:06:45
以电泳图谱分析的23s、16s条带的亮度来定量即可，而且电泳图可以很直观的反应RNA模板的完整性。
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2楼2011-08-23 14:19:01
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流， 2011-08-23 18:18:26
nininini(金币+2): 2011-08-23 19:42:05
个人看的文献一般都为OD260定量，通过图谱和OD比值来判断质量。
楼主可以根据你的目标杂志来做依据。
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3楼2011-08-23 17:06:14
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nininini

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by adslye at 2011-08-23 17:06:14:
个人看的文献一般都为OD260定量，通过图谱和OD比值来判断质量。
楼主可以根据你的目标杂志来做依据。

你好，我的OD比值在接受的范围内，不明白你所说的目标杂质是什么意思，能具体点儿吗？
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4楼2011-08-23 19:43:06
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

nininini(金币+2): 2011-08-25 09:12:31
引用回帖:
4楼: Originally posted by nininini at 2011-08-23 19:43:06:
你好，我的OD比值在接受的范围内，不明白你所说的目标杂质是什么意思，能具体点儿吗？

打错字。。。杂志~~~
您要投得杂志里面，文章一般用哪种定量。可能方便你后期投递。
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5楼2011-08-24 07:30:07
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-08-24 13:06:42
nininini(金币+2): 2011-08-25 09:12:49
我看到的文章一般都是采用OD值来定量的，采用电泳图谱来确定RNA 的完整性的。
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风雪夜归人
6楼2011-08-24 08:32:30
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nininini

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by adslye at 2011-08-24 07:30:07:
打错字。。。杂志~~~
您要投得杂志里面，文章一般用哪种定量。可能方便你后期投递。

有用，谢谢~~
但是我的图如上，这两中定量方法结果差距太大了，在反转中肯定有很大问题的吧
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7楼2011-08-25 09:13:57
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

nininini(金币+2): 2011-08-25 16:13:28
引用回帖:
7楼: Originally posted by nininini at 2011-08-25 09:13:57:
有用，谢谢~~
但是我的图如上，这两中定量方法结果差距太大了，在反转中肯定有很大问题的吧

在RNA干净的情况下肯定是测紫外更准。因为直接测的RNA的吸收。
凝胶可以想象成二手数据。首先要结合EB，其次跑胶过程中微观不可预知问题，
最后紫外激发EB发光，然后电脑拍照片。再将照片中的亮度通过数学模型转化为数值。
显然这种方法影响因素要多。
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8楼2011-08-25 10:47:34
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

23s：16S如果<1的样本尽量不要用。在此基础上用OD值
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寝室楼的大爷、大妈都是哲学家，他们每天都在思考人类最根本的三个问题：你是谁？你从哪儿来？要去哪儿？
9楼2011-08-25 12:29:02
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