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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于pcr内参b-actine的一个问题
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pop_hjx_41

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于pcr内参b-actine的一个问题 已有5人参与

想求教一个内参的问题
在RNA反转以后pcr检测的时候  β-actine做内参 想请问 β-actine在不同组织中的表达量是一致的吗？在同一组织中 刺激后不同时间表达的量应该一致吗？如果我反转出来 不同组织的β-actine表达量度不一致 可以在pcr目的基因的时候用作内参吗？
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1楼 2010-11-02 20:15:31
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
高深问题啊，帮顶
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小木虫之有关部门负责人
2楼2010-11-02 23:35:06
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cflikunlun

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2):good。 2010-11-03 08:46:11
之所以用actin 作内参，是因为它是持家基因，即使在不同处理下不同时间点在组织中表达量也应该是一致的。如果你要做半定量RTPCR，就需要调平该基因来消除取材，操作等过程引起的差异，这样目的基因的电泳图才能反应目的基因的表达变化，如果做realtimePCR就更没有问题了，相对定量是用目的基因的ct值减去了内参基因的CT值来反应变化量
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3楼2010-11-02 23:48:29
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wangy0908

金虫 (正式写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-11-03 08:46:20
不同组织以及不同处理中，这些基因的表达量一般不一样。所以需要你在重新筛选候选基因，选择相对稳定的基因来做内参。actine并不是在最稳定的。
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4楼2010-11-02 23:59:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢参与 2010-11-03 12:55:32
我是试过一个，GAPDH在同一来源但不同生理状态的细胞系，表达量是不一样的，而α-tubulin却相对稳定。我觉得你可以先都试试，看看哪一个才是最佳的
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5楼2010-11-03 09:33:14
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
lstt09nk(金币+1):辛苦 2010-11-03 12:55:48
不同组织的内参认为是一样的

如果你有异议，请调整你的模板浓度

这就是荧光定量的法则
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6楼2010-11-03 12:21:53
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