应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 合成一段DNA的问题？引物，PCR
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
141/1返回列表
查看: 3379  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 合成一段DNA的问题？引物，PCR

想合成一段双链的DNA，大概50个BP，好像公司合的话价格稍高。
想设计成两段引物，想问下如果是两段互补DNA双链的话可以利用一定条件直接使其结合成双链吗？或是设计成两段有重叠的引物，互为模板，是否可行呢？条件大概怎么控制？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-02-11 11:55:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
重叠延伸应该可行吧
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

loveskyzhou
2楼2012-02-11 12:13:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
运气好的话，理论上可行！
运气不好，还是得不到你想要的。
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-11 13:08:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by joan198108 at 2012-02-11 12:13:55:
重叠延伸应该可行吧

重叠延伸就是两段引物重叠相互P吧，可是这样做的话很难找到合适的Tm值啊，如果重叠过长Tm太高怎么P ？ 段的话又怕P不出来。。。。。
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-11 13:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2012-02-11 19:57:01
loveskyzhou(金币+1): 2012-02-13 17:46:40
可以合成两段寡核苷酸单链（加上酶切位点），加上退火缓冲液后从94度降温到退火温度，连到载体上转化大肠杆菌，测序验证，可以引入新的酶切位点等。
赞一下 回复此楼
5楼2012-02-11 13:33:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-02-11 13:29:57:
重叠延伸就是两段引物重叠相互P吧，可是这样做的话很难找到合适的Tm值啊，如果重叠过长Tm太高怎么P ？ 段的话又怕P不出来。。。。。

总厂才50bp，我有同学合成过70bp的引物，据说最后目的条带扩增成功，所以重叠可以适当的长一些。关键是PCR后的目的条带比较短，所以电泳分离就比较麻烦，如何保证最终的产物都是延伸完全的，这是个问题。
赞一下 回复此楼
6楼2012-02-11 13:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fwks3518

木虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
50bp，比引物长不了多少，那干脆按照引物合成算了，合成正反两条链，一搀和就双链了^_^
赞一下 回复此楼
7楼2012-02-11 15:19:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AnaSequence

金虫 (小有名气)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-11 13:33:32:
可以合成两段寡核苷酸单链（加上酶切位点），加上退火缓冲液后从94度降温到退火温度，连到载体上转化大肠杆菌，测序验证，可以引入新的酶切位点等。

有些钱不能省的。至少要像这个专家说的做。小片段最好不要再做延伸了，直接合成两条链变性退火形成酶切位点的，退火后就连接吧。再加入其它对连接而言是杂质的试剂就要纯化，小片段很不好纯化的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-02-11 20:52:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lizhaoge

铁虫 (初入文坛)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
应该可行！PCR条件要跟碱基数目和种类来定，可以在通过软件确定
赞一下 回复此楼
9楼2012-02-11 22:08:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fooooooooox

新虫 (初入文坛)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
合成两条30nt 单链，中间约10nt互补.加pcr酶，只用一个循环，延伸时间10分钟。要纯的话，可以3%胶回收。一般纯的话，用乙醇沉淀就可以了。
赞一下 回复此楼
10楼2012-02-12 00:07:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
loveskyzhou(金币+1): 2012-02-13 17:44:50
告诉你公司对这种小片段是怎么合成的：由于你要的DNA只有50bp，他们会先把这两条链分别合成（就当是合了两条50nt的引物，这个对于目前的技术非常容易实现），然后用这两条引物做个退火就OK了。这样得到的双链可以直接用来做连接或者PCR的模板
赞一下 回复此楼
11楼2012-02-12 09:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-11 13:33:32:
可以合成两段寡核苷酸单链（加上酶切位点），加上退火缓冲液后从94度降温到退火温度，连到载体上转化大肠杆菌，测序验证，可以引入新的酶切位点等。

是马上退到退火温度还是慢慢降温呢？
赞一下 回复此楼
12楼2012-02-13 17:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-02-13 17:47:09:
是马上退到退火温度还是慢慢降温呢？

可以用水浴锅，将温度升到94度后，光掉电源，让她慢慢降。。
赞一下 回复此楼
13楼2012-02-13 18:45:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物一点点

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我说啊，就别那么折腾了，现有的基因合成技术很成熟价格也不高，那么点片段500大洋搞定了，何必去搞那些呢，就算你引物设计好啦，合成要50块钱吧，等你拿到货要2-3天时间吧，你摸条件需要消耗20大洋左右吧，结果还没出来一周时间没啦，就算你比较走运p出来的是你的目的条带，你也拿去车测序验证吧，片段太小还不能直接测序那需要做克隆吧200大洋有没啦，测序费需要25吧，合计一下：295，这是比较幸运的有1%的可能。要不成功重头再来一次，那就得花500多大洋啦。时间的损失呢老板可不会心疼你的。所以还直接扔给测序公司。。。。
赞一下 回复此楼
14楼2012-03-25 19:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 loveskyzhou 的主题更新
141/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +9 哇呼哼呼哼 2026-04-02 10/500 2026-04-06 19:47 by jean5056
[考研] 材料专硕322 +11 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-05 11/550 2026-04-06 14:07 by lqwchd
[考研] 生物学求调剂 +5 15064154688 2026-04-03 5/250 2026-04-06 11:56 by lijunpoly
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 复试调剂 +5 asdasdassda 2026-04-05 5/250 2026-04-06 09:32 by dongzh2009
[考研] 材料专硕283求调剂 +17 试试看呗 2026-04-04 18/900 2026-04-06 09:24 by 286640313
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 283分求调剂 +7 小聂爱学习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 21:51 by hemengdong
[考研] 一志愿华南师范361分，化学求调剂 +7 Nicole88888 2026-04-01 7/350 2026-04-04 18:28 by macy2011
[考研] 348分环境工程·调剂 +10 吴彦祖24k 2026-04-03 11/550 2026-04-04 14:19 by 无际的草原
[考研] 297求调剂 +11 ljy20040718！ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 09:23 by 来看流星雨10
[基金申请] 请问共同通讯和共同一作的认可度问题 10+4 psa1234 2026-04-01 10/500 2026-04-03 11:08 by Kittylucky
[考研] 273求调剂 +20 李芷新1 2026-03-31 20/1000 2026-04-03 09:58 by linyelide
[考研] 338求调剂，一志愿能源动力，外语是日语203 +5 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:45 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:49 by liumengping
[考研] 321求调剂 一志愿 浙江工业大学生物医药 +5 嘿嘿HC 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:23 by sophie2180
[考研] 270调剂 +7 maxjxbsk 2026-04-02 7/350 2026-04-02 09:50 by yulian1987
[考研] 一志愿北交大材料工程，总分358 +4 cs0106 2026-04-01 4/200 2026-04-02 07:42 by 尚水阁主
[考研] 生物学327，求调剂 +5 书上的梅子 2026-04-01 6/300 2026-04-02 06:47 by ilovexiaobin
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭