应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 合成一段DNA的问题？引物，PCR
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
141/1返回列表
查看: 3383  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 合成一段DNA的问题？引物，PCR

想合成一段双链的DNA，大概50个BP，好像公司合的话价格稍高。
想设计成两段引物，想问下如果是两段互补DNA双链的话可以利用一定条件直接使其结合成双链吗？或是设计成两段有重叠的引物，互为模板，是否可行呢？条件大概怎么控制？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-02-11 11:55:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
重叠延伸应该可行吧
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

loveskyzhou
2楼2012-02-11 12:13:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
运气好的话，理论上可行！
运气不好，还是得不到你想要的。
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-11 13:08:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by joan198108 at 2012-02-11 12:13:55:
重叠延伸应该可行吧

重叠延伸就是两段引物重叠相互P吧，可是这样做的话很难找到合适的Tm值啊，如果重叠过长Tm太高怎么P ？ 段的话又怕P不出来。。。。。
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-11 13:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2012-02-11 19:57:01
loveskyzhou(金币+1): 2012-02-13 17:46:40
可以合成两段寡核苷酸单链（加上酶切位点），加上退火缓冲液后从94度降温到退火温度，连到载体上转化大肠杆菌，测序验证，可以引入新的酶切位点等。
赞一下 回复此楼
5楼2012-02-11 13:33:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-02-11 13:29:57:
重叠延伸就是两段引物重叠相互P吧，可是这样做的话很难找到合适的Tm值啊，如果重叠过长Tm太高怎么P ？ 段的话又怕P不出来。。。。。

总厂才50bp，我有同学合成过70bp的引物，据说最后目的条带扩增成功，所以重叠可以适当的长一些。关键是PCR后的目的条带比较短，所以电泳分离就比较麻烦，如何保证最终的产物都是延伸完全的，这是个问题。
赞一下 回复此楼
6楼2012-02-11 13:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fwks3518

木虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
50bp，比引物长不了多少，那干脆按照引物合成算了，合成正反两条链，一搀和就双链了^_^
赞一下 回复此楼
7楼2012-02-11 15:19:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AnaSequence

金虫 (小有名气)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-11 13:33:32:
可以合成两段寡核苷酸单链（加上酶切位点），加上退火缓冲液后从94度降温到退火温度，连到载体上转化大肠杆菌，测序验证，可以引入新的酶切位点等。

有些钱不能省的。至少要像这个专家说的做。小片段最好不要再做延伸了，直接合成两条链变性退火形成酶切位点的，退火后就连接吧。再加入其它对连接而言是杂质的试剂就要纯化，小片段很不好纯化的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-02-11 20:52:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lizhaoge

铁虫 (初入文坛)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
应该可行！PCR条件要跟碱基数目和种类来定，可以在通过软件确定
赞一下 回复此楼
9楼2012-02-11 22:08:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fooooooooox

新虫 (初入文坛)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
合成两条30nt 单链，中间约10nt互补.加pcr酶，只用一个循环，延伸时间10分钟。要纯的话，可以3%胶回收。一般纯的话，用乙醇沉淀就可以了。
赞一下 回复此楼
10楼2012-02-12 00:07:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
loveskyzhou(金币+1): 2012-02-13 17:44:50
告诉你公司对这种小片段是怎么合成的：由于你要的DNA只有50bp，他们会先把这两条链分别合成（就当是合了两条50nt的引物，这个对于目前的技术非常容易实现），然后用这两条引物做个退火就OK了。这样得到的双链可以直接用来做连接或者PCR的模板
赞一下 回复此楼
11楼2012-02-12 09:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-11 13:33:32:
可以合成两段寡核苷酸单链（加上酶切位点），加上退火缓冲液后从94度降温到退火温度，连到载体上转化大肠杆菌，测序验证，可以引入新的酶切位点等。

是马上退到退火温度还是慢慢降温呢？
赞一下 回复此楼
12楼2012-02-13 17:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-02-13 17:47:09:
是马上退到退火温度还是慢慢降温呢？

可以用水浴锅，将温度升到94度后，光掉电源，让她慢慢降。。
赞一下 回复此楼
13楼2012-02-13 18:45:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物一点点

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我说啊，就别那么折腾了，现有的基因合成技术很成熟价格也不高，那么点片段500大洋搞定了，何必去搞那些呢，就算你引物设计好啦，合成要50块钱吧，等你拿到货要2-3天时间吧，你摸条件需要消耗20大洋左右吧，结果还没出来一周时间没啦，就算你比较走运p出来的是你的目的条带，你也拿去车测序验证吧，片段太小还不能直接测序那需要做克隆吧200大洋有没啦，测序费需要25吧，合计一下：295，这是比较幸运的有1%的可能。要不成功重头再来一次，那就得花500多大洋啦。时间的损失呢老板可不会心疼你的。所以还直接扔给测序公司。。。。
赞一下 回复此楼
14楼2012-03-25 19:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 loveskyzhou 的主题更新
141/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +12 梁富贵险中求 2026-04-04 12/600 2026-04-06 22:54 by chenzhimin
[考研] 307求调剂 +8 超级伊昂大王 2026-04-06 8/400 2026-04-06 22:50 by qlm5820
[考研] 材料科学与工程320求调剂，080500 +7 黄瓜味薯片 2026-04-06 7/350 2026-04-06 22:38 by qlm5820
[考研] 08600生物与医药-327 +9 18755400796 2026-04-05 9/450 2026-04-06 22:35 by 52305043001
[考研] 071000生物学调剂 +7 拉提桃 2026-04-06 7/350 2026-04-06 18:55 by 52305043001
[考研] 301求调剂 +6 细胞相关蛋白 2026-04-02 10/500 2026-04-06 08:34 by jp9609
[考研] 085600，320分求调剂 +16 大馋小子 2026-04-04 17/850 2026-04-06 07:58 by MOF_Catal
[考研] 283求调剂 +5 baiiyu 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:35 by 啵啵啵0119
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 求调剂，一志愿南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-04-03 10/500 2026-04-04 09:01 by T可可西里T
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 08工科275分求调剂 +14 AaAa7420 2026-03-31 14/700 2026-04-03 11:13 by cocolv
[考研] 专硕 351 086100 也是考的材科基 本科也是材料 +8 202451007219 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:50 by 蓝云思雨
[考研] 08开头看过来！！！ +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 0710生物学，325求调剂 +3 mkkkkkl 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:48 by Jaylen.
[考研] 考研调剂 +12 Amber00 2026-03-31 12/600 2026-04-02 09:04 by sanrepian
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
[考研] 301求调剂 +8 axibli 2026-04-01 8/400 2026-04-01 09:51 by 我的船我的海
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭