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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？
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ap

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？已有10人参与

我提取黑曲霉基因组，PCR三段片段，分别为6kb，6kb，1.6kb。结果都是杂带，没有目的带。
而我以大肠基因组为模板PCR一段基因，却非常顺利。
是黑曲霉PCR引物我设计的不好？还是真菌基因组为模板的PCR本身就不好做？
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1楼2010-07-30 11:28:05
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qingxiong

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是扩增的片段太长了呢？
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2楼2010-07-30 12:00:24
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qingxiong

木虫 (正式写手)
★ ★
看天(金币+2):鼓励交流 2010-07-30 12:20:21
又或者是真菌模板质量不好呢，扩不出来有很多原因的，扩增体系，扩增条件优化了没有呢？
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3楼2010-07-30 12:01:36
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ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qingxiong at 2010-07-30 12:01:36:
又或者是真菌模板质量不好呢，扩不出来有很多原因的，扩增体系，扩增条件优化了没有呢？

基因组好像提得不好，量很少。做过退火温度梯度和模板浓度梯度，都没有目的带。杂带是在退火温度低、模板浓度大的时候比较亮。
觉得主要还是引物的问题？关键是目的带就没有，杂带还挺亮的。很郁闷。
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4楼2010-07-30 12:37:25
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hyhyyl

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
哈，你PCR的模板浓度优化了吗？太高时扩不出的
再就是你的模板质量怎么样，蛋白质不要紧不大影响，但是绝对不能有苯酚等有机试剂
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希望成为大家的好朋友
5楼2010-07-30 12:45:18
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ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hyhyyl at 2010-07-30 12:45:18:
哈，你PCR的模板浓度优化了吗？太高时扩不出的
再就是你的模板质量怎么样，蛋白质不要紧不大影响，但是绝对不能有苯酚等有机试剂

把提的基因组，做了10倍和100倍稀释，发现10倍的杂带更亮一些，可能是基因组提的不大好，量比较少。
基因组是用试剂盒提的，不过试剂盒好像过期了。苯酚应该没有。
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6楼2010-07-30 12:52:37
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先考虑模板问题，个人认为一般是模板问题，引物一般没什么太大问题，建议你用降落PCR来做。。。
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7楼2010-07-30 15:21:11
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ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-07-30 15:21:11:
首先考虑模板问题，个人认为一般是模板问题，引物一般没什么太大问题，建议你用降落PCR来做。。。

好的，我重新提一次基因组再做一下
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8楼2010-07-30 16:34:27
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做做全细胞试试，有同学有把一个虫子扔进去，P出来的！这样比较快……再提DNA……
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9楼2010-07-30 16:44:35
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ap at 2010-07-30 16:34:27:

好的，我重新提一次基因组再做一下

最好把你之前提DNA跑的电泳图发上来看看
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10楼2010-07-30 16:47:23
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