应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？
191/2返回列表12下一页
查看: 2770  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ap

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？ 已有10人参与

我提取黑曲霉基因组，PCR三段片段，分别为6kb，6kb，1.6kb。结果都是杂带，没有目的带。
而我以大肠基因组为模板PCR一段基因，却非常顺利。
是黑曲霉PCR引物我设计的不好？还是真菌基因组为模板的PCR本身就不好做？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-30 11:28:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingxiong

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是扩增的片段太长了呢？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-07-30 12:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingxiong

木虫 (正式写手)
★ ★
看天(金币+2):鼓励交流 2010-07-30 12:20:21
又或者是真菌模板质量不好呢，扩不出来有很多原因的，扩增体系，扩增条件优化了没有呢？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-07-30 12:01:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qingxiong at 2010-07-30 12:01:36:
又或者是真菌模板质量不好呢，扩不出来有很多原因的，扩增体系，扩增条件优化了没有呢？

基因组好像提得不好，量很少。做过退火温度梯度和模板浓度梯度，都没有目的带。杂带是在退火温度低、模板浓度大的时候比较亮。
觉得主要还是引物的问题？关键是目的带就没有，杂带还挺亮的。很郁闷。
赞一下 回复此楼
4楼2010-07-30 12:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyhyyl

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
哈，你PCR的模板浓度优化了吗？太高时扩不出的
再就是你的模板质量怎么样，蛋白质不要紧不大影响，但是绝对不能有苯酚等有机试剂
赞一下(1人) 回复此楼
希望成为大家的好朋友
5楼2010-07-30 12:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hyhyyl at 2010-07-30 12:45:18:
哈，你PCR的模板浓度优化了吗？太高时扩不出的
再就是你的模板质量怎么样，蛋白质不要紧不大影响，但是绝对不能有苯酚等有机试剂

把提的基因组，做了10倍和100倍稀释，发现10倍的杂带更亮一些，可能是基因组提的不大好，量比较少。
基因组是用试剂盒提的，不过试剂盒好像过期了。苯酚应该没有。
赞一下 回复此楼
6楼2010-07-30 12:52:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先考虑模板问题，个人认为一般是模板问题，引物一般没什么太大问题，建议你用降落PCR来做。。。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-07-30 15:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-07-30 15:21:11:
首先考虑模板问题，个人认为一般是模板问题，引物一般没什么太大问题，建议你用降落PCR来做。。。

好的，我重新提一次基因组再做一下
赞一下 回复此楼
8楼2010-07-30 16:34:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做做全细胞试试，有同学有把一个虫子扔进去，P出来的！这样比较快……再提DNA……
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-07-30 16:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ap at 2010-07-30 16:34:27:

好的，我重新提一次基因组再做一下

最好把你之前提DNA跑的电泳图发上来看看
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-07-30 16:47:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ap 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 号外号外 +8 GZUZM 2026-08-24 8/400 2026-08-24 19:22 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 人气不行了 +9 fansofjerry 2026-08-21 9/450 2026-08-24 17:48 by zhaozhengxin
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +6 图啦图啦 2026-08-24 6/300 2026-08-24 17:44 by 小小红帆
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +5 scalable 2026-08-24 5/250 2026-08-24 17:03 by spiderzhuzhi
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭