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shawne2008木虫 (著名写手)
木虫反贪局局长
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【求助/交流】真菌提取基因组DNA的方法 已有7人参与
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| 近来做耐盐菌筛选，已经做到提取DNA测序的阶段了，可是破壁的问题却一直不理想，几种方法都试过，可是效果不好，不知大家有什么方法和经验提供一下，谢谢！！！ |
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2楼2010-05-28 23:37:36
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3楼2010-05-28 23:57:32
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shawne2008(金币+10): 2010-05-29 00:10:05
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1. 将样品放在灭过菌的研钵中，加入液氮捣碎，迅速转入1.5ml离心管中，加入600mlCTAB（或同时加入石英砂和CTAB研磨，然 后转入1.5ml离心管中）； 2. 65℃水浴1h（每20min反转摇匀一次）； 3. 加等体积的氯仿－异戊醇（体积比24：1），或加入苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀； 4. 6500rpm离心30min，取上清于新管中； 5. 重复4，5步骤； 6. 向上清中加入2倍体积的无水乙醇（或2/3体积的异丙醇）沉淀DNA，-20℃放置20min或更长时间，或过夜； 7. 加75％的乙醇清洗DNA，每次12000rpm 2min，去上清； 8. 风干后加入40ul的TE缓冲液溶解DNA； 9. 取2ul溶液电泳检测。 |
4楼2010-05-29 00:04:30
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