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为什么提取的DNA总是降解？ 已有27人参与
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各位大侠，为什么我提取的DNA总是降解呢？用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法，最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀，TE溶解过夜，琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图）。分光光度计检测浓度和纯度都正常。实验室几个人提取都是这样，不知道是什么原因，所用的试剂已经重新配过，还是这个结果。请问有没有遇到过类似情况的，这是什么原因，怎么解决呢？请大家指点帮助~  |
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5楼2011-08-18 18:08:52
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看天(金币+4): 鼓励回答 2011-08-18 23:50:56
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gDNA降解无非两个原因： 1.细胞内DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前没有在细胞破碎的情况下放久吧？ 2.机械力作用：有很剧烈的长时间涡旋吗？或者之类的。但一般也不会有事。 另外，至于PH，水饱和酚（PH4）条件下，gDNA溶于有机相，应该提不出来。TRIS饱和酚，如果过期也是蛋白除不尽。我觉得应该不是酚的问题。 我看你第二张图最后一孔gDNA正常，没降解。是同同批次，同操作吗？如果是，说明操作失误。 我的解决方法是：不要再去想了（这个实验真的很难做出降解  ）。换一个方法，买一个kit，gDNA提取试剂盒很便宜的。 |
6楼2011-08-18 19:14:12
rioarsenal
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