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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么提取的DNA总是降解？
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

[交流] 为什么提取的DNA总是降解？ 已有27人参与

各位大侠，为什么我提取的DNA总是降解呢？用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法，最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀，TE溶解过夜，琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图）。分光光度计检测浓度和纯度都正常。实验室几个人提取都是这样，不知道是什么原因，所用的试剂已经重新配过，还是这个结果。请问有没有遇到过类似情况的，这是什么原因，怎么解决呢？请大家指点帮助~
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时间是贼，偷走一切……
1楼 2011-08-18 14:25:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

silicare

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
注意你酚氯仿的PH值
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2楼2011-08-18 14:27:01
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水泗晶

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你看见的大量絮状物也有可能是杂质的，你萃取了几遍？你DNA溶完后是不是没有及时放进冰箱？我看你有块胶跑的条带有些乱，你的电流没有控制好
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29楼2012-03-23 18:53:46
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leebiao

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的问题解决了吗，我也遇到相同问题了。
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39楼2014-11-24 10:39:34
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普通回帖

永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 永不后悔2838 at 2011-08-18 14:25:07:
各位大侠，为什么我提取的DNA总是降解呢？用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法，最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀，TE溶解过夜，琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图）。分光光度计检测浓度和纯度都正 ...

非常感谢，那个都是从公司买的，而且也换过不同的，结果还一样，请问还有别的可能吗？
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时间是贼，偷走一切……
3楼2011-08-18 17:38:06
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by silicare at 2011-08-18 14:27:01:
注意你酚氯仿的PH值

非常感谢，那个都是从公司买的，而且也换过不同的，结果还一样，请问还有别的可能吗？
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时间是贼，偷走一切……
4楼2011-08-18 17:39:01
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silicare

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★
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-08-19 18:11:07
引用回帖:
4楼: Originally posted by 永不后悔2838 at 2011-08-18 17:39:01:
非常感谢，那个都是从公司买的，而且也换过不同的，结果还一样，请问还有别的可能吗？

PH是多少
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5楼2011-08-18 18:08:52
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看天(金币+4): 鼓励回答 2011-08-18 23:50:56
gDNA降解无非两个原因：
1.细胞内DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前没有在细胞破碎的情况下放久吧？
2.机械力作用：有很剧烈的长时间涡旋吗？或者之类的。但一般也不会有事。

另外，至于PH，水饱和酚（PH4）条件下，gDNA溶于有机相，应该提不出来。TRIS饱和酚，如果过期也是蛋白除不尽。我觉得应该不是酚的问题。

我看你第二张图最后一孔gDNA正常，没降解。是同同批次，同操作吗？如果是，说明操作失误。

我的解决方法是：不要再去想了（这个实验真的很难做出降解）。换一个方法，买一个kit，gDNA提取试剂盒很便宜的。
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6楼2011-08-18 19:14:12
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by 永不后悔2838 at 2011-08-18 14:25:07:
各位大侠，为什么我提取的DNA总是降解呢？用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法，最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀，TE溶解过夜，琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图）。分光光度计检测浓度和纯度都正 ...

楼主提的什么材料，怎么粉碎的，是否加入了蛋白酶K来抑制内源性DNA酶？
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7楼2011-08-18 21:52:24
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hqc87

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看天(金币+1): 鼓励交流 2011-08-18 23:51:05
一直用CTAB法提植物DNA，没出过问题
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8楼2011-08-18 22:50:18
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我做过用ctab法提取，并且实验试剂都是自己配的，不过我没有进行DNA电泳，直接后续实验，结果也很好，楼主可以试着后续实验，看看效果。
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风雪夜归人
9楼2011-08-19 08:33:33
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by silicare at 2011-08-18 18:08:52:
PH是多少

没测过，我测测试试，谢谢建议~
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时间是贼，偷走一切……
10楼2011-08-19 08:48:50
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