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为什么提取的DNA总是降解？已有27人参与
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各位大侠，为什么我提取的DNA总是降解呢？用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法，最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀，TE溶解过夜，琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图）。分光光度计检测浓度和纯度都正常。实验室几个人提取都是这样，不知道是什么原因，所用的试剂已经重新配过，还是这个结果。请问有没有遇到过类似情况的，这是什么原因，怎么解决呢？请大家指点帮助~  |
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看天(金币+4): 鼓励回答 2011-08-18 23:50:56
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看天(金币+4): 鼓励回答 2011-08-18 23:50:56
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gDNA降解无非两个原因： 1.细胞内DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前没有在细胞破碎的情况下放久吧？ 2.机械力作用：有很剧烈的长时间涡旋吗？或者之类的。但一般也不会有事。 另外，至于PH，水饱和酚（PH4）条件下，gDNA溶于有机相，应该提不出来。TRIS饱和酚，如果过期也是蛋白除不尽。我觉得应该不是酚的问题。 我看你第二张图最后一孔gDNA正常，没降解。是同同批次，同操作吗？如果是，说明操作失误。 我的解决方法是：不要再去想了（这个实验真的很难做出降解  ）。换一个方法，买一个kit，gDNA提取试剂盒很便宜的。 |
6楼2011-08-18 19:14:12
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20楼2011-08-19 09:19:33
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大量絮状？看你凝胶条带不亮额。溶得很稀？ 我做植物的，当我出现大量絮状都是因为多糖。gDNA一开始不会出现很多。动物我不知道会有哪些干扰物质。 另外，看silicare的提醒。我重看了你的胶。首先两块胶都不亮，尤其是下面的，marker都不亮。EB是不是加少了，还是胶放久了。 你marker是多少的。感觉你的条带都是隐约的两条。这样的话有可能是降解不完全的RNA。RNA18S大约1900，28s大约4700。你自己对照下。而这样有可能就是用错酚了。） 只能帮你分析这么多了。不过楼上有位建议不错：用新买试剂盒，能提出，说明现有试剂有问题（要不用错，要不过期）。不能提出，那就是样品在组织里已经降解。 [ Last edited by adslye on 2011-8-19 at 10:13 ] |
21楼2011-08-19 09:21:37