应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 小鼠肝脏基因组DNA提取大部分降解为300-500bp了
121/1返回列表
查看: 3005  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

athenawj

新虫 (初入文坛)

[交流] 小鼠肝脏基因组DNA提取大部分降解为300-500bp了

出现降解很严重，大部分都在300-500bp左右。也就蛋白酶Ｋ多加了点，还有别的原因吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-11-11 21:24:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

athenawj

新虫 (初入文坛)
顶顶啊，好久不做琼脂糖电泳了，可以看出来样品有没有杂质啊？
赞一下 回复此楼
2楼2011-11-11 21:32:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LIUZHIYONG0791

木虫 (正式写手)
★
athenawj(金币+1):谢谢参与
没看懂你的胶图,左边是MARK吧,接下来的三根泳道没见东西啊
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-11-12 08:56:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+6, BioEPI+1): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:20:42
基因组DNA？跑电泳不是应该用Lambda/HIII DNA Marker（有23k条带）好一些吗？

1、东西要干净，高温灭菌处理，操作不宜过于剧烈。如需要非常完整的基因组，则枪头最好做钝化处理更好。
2、肝脏应该很容易裂解，裂解时间不宜过久，把组织块匀浆一下，加蛋白酶K 50-55度水浴消化上30-60min或直至无可见组织块即可。
3、肝脏同时会有很多RNA，有些电泳看起来“降解”可能是未完全消化彻底的RNA造成的，如希望得到无RNA污染的DNA，可适当增加RNase用量及消化时间。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-11-12 09:53:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

athenawj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by LIUZHIYONG0791 at 2011-11-12 08:56:12:
没看懂你的胶图,左边是MARK吧,接下来的三根泳道没见东西啊

每次只跑两个孔，左边是1KB marker,右边是LE2000做marker的
赞一下 回复此楼
7楼2011-11-13 15:16:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
试剂盒做的嘛
回复此楼
8楼2011-11-13 22:28:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyz20050505

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
右边的图，基因组DNA虽有降解，但在远大于2K的地方还是有明显的主带，这个拿去扩扩普通的PCR还可以的。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-11-17 10:32:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

NDA提取

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
有机会可以用下俺家高通量组织研磨器. 可以在DNA RNA提取过程中代替液氮手动研磨, 只需把物料和研磨球加入1.5/2ml离心管中，离心管放入我们提供的耐低温适配器上，把适配器和夹具放入液氮中，冷冻3-5分钟，取出，加裂解液（也可不加），即可进行研磨。每台研磨仪配2个适配器，每个适配器可以放的1.5/2ml离心管的数量是24个，这样2个适配器同时工作， 即可一次研磨48个样品，这些样品的研磨在2-3min内即可研磨完成，时间短，效率高。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-11-17 15:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liugangpk545

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by longrna at 2011-11-12 09:53:28:
基因组DNA？跑电泳不是应该用Lambda/HIII DNA Marker（有23k条带）好一些吗？

1、东西要干净，高温灭菌处理，操作不宜过于剧烈。如需要非常完整的基因组，则枪头最好做钝化处理更好。
2、肝脏应该很容易裂解， ...

受教了   谢谢
回复此楼
11楼2011-12-06 16:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lh0510

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
１.首先这东西不叫“降解”，更不是DNA降解那么简单，要非常清楚肝脏的物流中心作用以及DNA表达时谱的存在。
２.EB莹光代表的是什么？核酸，核酸不等于基因组，更不是等同于楼主所说的基因组DNA。
３.如图的方法中光斑定量上是不太好度量的，管理上说不可度量的东西是不存在的。你结论的根据是不是就不牢了？呵呵
总之，这个情况图谱基本上是正常的样本正常结果,我提取的小鼠肝脏DNA样本直接跑琼脂糖也是类似的情况，没有影响PCR和结果；楼上的１０条都是有道理，原因是多方面的；Try－ture、相信自己，持续追踪它。

[ Last edited by lh0510 on 2013-6-10 at 08:58 ]
赞一下 回复此楼
12楼2013-06-10 08:51:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
athenawj3楼
2011-11-11 21:58   回复  
牛奶可乐5楼
2011-11-12 09:28   回复  
athenawj(金币+1):谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 athenawj 的主题更新
121/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +4 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:21 by 216的故事
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +7 rare12345 2026-03-18 7/350 2026-03-18 14:31 by laoshidan
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:27 by Little-xue
[考研] 085600材料与化工求调剂 +5 绪幸与子 2026-03-17 5/250 2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 26考研求调剂 +6 丶宏Sir 2026-03-13 6/300 2026-03-17 16:13 by 醉在风里
[考研] 求调剂，总分315，考的生物医药，一志愿湖南师范大学。调剂到任何专业都可以 +4 小丁想进步 2026-03-11 5/250 2026-03-17 16:05 by 外星文明
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭