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athenawj

新虫 (初入文坛)


[交流] 小鼠肝脏基因组DNA提取大部分降解为300-500bp了

出现降解很严重,大部分都在300-500bp左右。也就蛋白酶K多加了点,还有别的原因吗?
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longrna

新虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+6, BioEPI+1): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:20:42
基因组DNA?跑电泳不是应该用Lambda/HIII DNA Marker(有23k条带)好一些吗?

1、东西要干净,高温灭菌处理,操作不宜过于剧烈。如需要非常完整的基因组,则枪头最好做钝化处理更好。
2、肝脏应该很容易裂解,裂解时间不宜过久,把组织块匀浆一下,加蛋白酶K 50-55度水浴消化上30-60min或直至无可见组织块即可。
3、肝脏同时会有很多RNA,有些电泳看起来“降解”可能是未完全消化彻底的RNA造成的,如希望得到无RNA污染的DNA,可适当增加RNase用量及消化时间。
6楼2011-11-12 09:53:28
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athenawj

新虫 (初入文坛)


顶顶啊,好久不做琼脂糖电泳了,可以看出来样品有没有杂质啊?
2楼2011-11-11 21:32:42
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LIUZHIYONG0791

木虫 (正式写手)



athenawj(金币+1):谢谢参与
没看懂你的胶图,左边是MARK吧,接下来的三根泳道没见东西啊
4楼2011-11-12 08:56:12
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athenawj

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
4楼: Originally posted by LIUZHIYONG0791 at 2011-11-12 08:56:12:
没看懂你的胶图,左边是MARK吧,接下来的三根泳道没见东西啊

每次只跑两个孔,左边是1KB marker,右边是LE2000做marker的
7楼2011-11-13 15:16:09
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athenawj3楼
2011-11-11 21:58   回复  
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