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小鼠肝脏基因组DNA提取大部分降解为300-500bp了
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athenawj
新虫
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虫号: 1335558
[交流]
小鼠肝脏基因组DNA提取大部分降解为300-500bp了
出现降解很严重,大部分都在300-500bp左右。也就蛋白酶K多加了点,还有别的原因吗?
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2011-11-11 21:24:26
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NDA提取
新虫
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虫号: 1496370
★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖
有机会可以用下俺家高通量组织研磨器. 可以在DNA RNA提取过程中代替液氮手动研磨, 只需把物料和研磨球加入1.5/2ml离心管中,离心管放入我们提供的耐低温适配器上,把适配器和夹具放入液氮中,冷冻3-5分钟,取出,加裂解液(也可不加),即可进行研磨。每台研磨仪配2个适配器,每个适配器可以放的1.5/2ml离心管的数量是24个,这样2个适配器同时工作, 即可一次研磨48个样品,这些样品的研磨在2-3min内即可研磨完成,时间短,效率高。
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10楼
2011-11-17 15:16:35
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athenawj
新虫
(初入文坛)
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虫号: 1335558
顶顶啊,好久不做琼脂糖电泳了,可以看出来样品有没有杂质啊?
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2楼
2011-11-11 21:32:42
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LIUZHIYONG0791
木虫
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★
athenawj(金币
+1
):谢谢参与
没看懂你的胶图,左边是MARK吧,接下来的三根泳道没见东西啊
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4楼
2011-11-12 08:56:12
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longrna
新虫
(正式写手)
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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
athenawj(金币
+1
):谢谢参与
silicare(金币+6, BioEPI+1): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:20:42
基因组DNA?跑电泳不是应该用Lambda/HIII DNA Marker(有23k条带)好一些吗?
1、东西要干净,高温灭菌处理,操作不宜过于剧烈。如需要非常完整的基因组,则枪头最好做钝化处理更好。
2、肝脏应该很容易裂解,裂解时间不宜过久,把组织块匀浆一下,加蛋白酶K 50-55度水浴消化上30-60min或直至无可见组织块即可。
3、肝脏同时会有很多RNA,有些电泳看起来“降解”可能是未完全消化彻底的RNA造成的,如希望得到无RNA污染的DNA,可适当增加RNase用量及消化时间。
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6楼
2011-11-12 09:53:28
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athenawj
3楼
2011-11-11 21:58
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