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小鼠肝脏基因组DNA提取大部分降解为300-500bp了
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出现降解很严重，大部分都在300-500bp左右。也就蛋白酶Ｋ多加了点，还有别的原因吗？ |
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2楼2011-11-11 21:32:42
4楼2011-11-12 08:56:12
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+6, BioEPI+1): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:20:42
athenawj(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+6, BioEPI+1): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:20:42
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基因组DNA？跑电泳不是应该用Lambda/HIII DNA Marker（有23k条带）好一些吗？ 1、东西要干净，高温灭菌处理，操作不宜过于剧烈。如需要非常完整的基因组，则枪头最好做钝化处理更好。 2、肝脏应该很容易裂解，裂解时间不宜过久，把组织块匀浆一下，加蛋白酶K 50-55度水浴消化上30-60min或直至无可见组织块即可。 3、肝脏同时会有很多RNA，有些电泳看起来“降解”可能是未完全消化彻底的RNA造成的，如希望得到无RNA污染的DNA，可适当增加RNase用量及消化时间。 |
6楼2011-11-12 09:53:28
7楼2011-11-13 15:16:09
8楼2011-11-13 22:28:19
9楼2011-11-17 10:32:54
10楼2011-11-17 15:16:35
11楼2011-12-06 16:12:47
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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１.首先这东西不叫“降解”，更不是DNA降解那么简单，要非常清楚肝脏的物流中心作用以及DNA表达时谱的存在。 ２.EB莹光代表的是什么？核酸，核酸不等于基因组，更不是等同于楼主所说的基因组DNA。 ３.如图的方法中光斑定量上是不太好度量的，管理上说不可度量的东西是不存在的。你结论的根据是不是就不牢了？呵呵 总之，这个情况图谱基本上是正常的样本正常结果,我提取的小鼠肝脏DNA样本直接跑琼脂糖也是类似的情况，没有影响PCR和结果；楼上的１０条都是有道理，原因是多方面的；Try－ture、相信自己，持续追踪它。 [ Last edited by lh0510 on 2013-6-10 at 08:58 ] |
12楼2013-06-10 08:51:16
简单回复
athenawj3楼
2011-11-11 21:58
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牛奶可乐5楼
2011-11-12 09:28
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athenawj(金币+1):谢谢参与
