应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么DNA提取总降解
161/2返回列表12下一页
查看: 6889  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

该死的玻璃杯

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么DNA提取总降解

目的：从一种丝状真菌中提取DNA进行基因组测序。

问题：使用过多种方法进行提取（液氮研磨、珠打、玻璃棒研磨等）。提取最后样品加TE/水溶解后样品呈乳白色，看不到通常DNA的絮状沉淀。跑胶检测，RNA条带非常亮，看不到DNA条带或者带很弱。样品提取之后曾使用RNase进行处理、使用常规方法提取后过柱子回收DNA、在提取过程中在CTAB温育之前进行RNase的处理等。该DNA样品含有很多RNA，需要处理掉RNA，但是其DNA对酶极其敏感，甚至沸水处理了半小时的RNase溶液加入样品中也可以造成DNA的降解，包括过柱子的方法也造成DNA的降解。

说明：该菌含多糖较多，生长缓慢

请高人指教！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-18 09:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 有经验！ 2011-08-10 23:08:58
多糖含量高的组织推荐使用CTAB法。因为多糖和核酸的性质接近，容易造成核酸和多糖共沉淀而被除去。
赞一下(2人) 回复此楼
How about the future？
8楼2011-08-10 22:56:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4, MolEPI+1): Good! EDTA通过螯合金属离子，可以抑制包括DNA酶在内的很多酶的活性。 2011-08-10 23:21:48
小丹木木: 回帖置顶 2012-02-20 15:09:29
dna容易被降解多半因为有内原性的核酸酶没有去除，解决办法是楼上说的酚氯仿抽提，但真菌基因组较大，容易因该操作发生断裂，也可以在最后加一步蛋白酶K消化，体系中加入较多量的EDTA，因杂质性质的DNA酶多数需要金属离子做辅酶。
赞一下(3人) 回复此楼
How about the future？
9楼2011-08-10 23:08:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good 2011-08-11 12:10:48
1、DNA的质量与材料的状态有很大关系，一般应该取柔嫩的组织。你用的丝状真菌，是否前期培养时间比较长，菌丝有老化现象，那样的话，dna肯定不好；
2、楼上的方法比较有效，可以加入蛋白酶。
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-08-11 06:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

追远0102

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 该死的玻璃杯 at 2011-05-18 09:00:30:
目的：从一种丝状真菌中提取DNA进行基因组测序。

问题：使用过多种方法进行提取（液氮研磨、珠打、玻璃棒研磨等）。提取最后样品加TE/水溶解后样品呈乳白色，看不到通常DNA的絮状沉淀。跑胶检测，RNA条带非常亮 ...

开学再读研，顶起，我也想知道
赞一下 回复此楼
逐步适应
2楼2011-05-18 11:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！ 2011-05-18 11:38:19
引用回帖:
Originally posted by 该死的玻璃杯 at 2011-05-18 09:00:30:
目的：从一种丝状真菌中提取DNA进行基因组测序。

问题：使用过多种方法进行提取（液氮研磨、珠打、玻璃棒研磨等）。提取最后样品加TE/水溶解后样品呈乳白色，看不到通常DNA的絮状沉淀。跑胶检测，RNA条带非常亮 ...

用TE溶解，本来就看不到DNA吧，你跑胶都看不到DNA，那你会不会是本来就没有DNA呢？
液氮研磨之后，用TE溶解，然后离心沉淀，去上清，用乙醇沉淀，再把沉淀跑电泳看有没有，之后再优化
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-05-18 11:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

springTT

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-05-18 14:39:16
我们实验室用玻璃珠法提真菌DNA，效果还不错。整个过程没有用到TE溶液，在最后加入RNase 37℃消化1h。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-18 11:55:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 是有些区别的 2011-05-18 14:39:37
真菌的没有提过，这种破菌后难道不用苯酚氯仿抽提的吗？一般不都是加苯酚氯仿抽提后，再加乙醇沉淀，然后溶解去RNA？
赞一下(1人) 回复此楼
在等待中涅槃重生
5楼2011-05-18 12:31:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilirong2009

铜虫 (小有名气)
我遇到的情况和楼主相似，我提大肠杆菌基因组DNA也是总是降解，用试剂盒也一样降解，加Rnase除去RNA的结果DNA也没有了，真不知道是什么原因
赞一下 回复此楼
6楼2011-07-22 22:38:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
我也遇到这个情况了啊，一直找不到原因，不知道楼主解决了没有呢，盼望回复~
赞一下 回复此楼
时间是贼，偷走一切……
7楼2011-08-10 21:27:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 该死的玻璃杯 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自科面上基金字体 +4 iwuli 2026-03-12 5/250 2026-03-15 17:07 by 风云无泪
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 0703化学求调剂 +5 很老实人 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:57 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂（085602一志愿985） +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 材料调剂，307分 +13 张泳铭1 2026-03-09 17/850 2026-03-13 11:09 by 薛云鹏
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭