应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么DNA提取总降解
51/1返回列表
查看: 6912  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

该死的玻璃杯

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么DNA提取总降解

目的：从一种丝状真菌中提取DNA进行基因组测序。

问题：使用过多种方法进行提取（液氮研磨、珠打、玻璃棒研磨等）。提取最后样品加TE/水溶解后样品呈乳白色，看不到通常DNA的絮状沉淀。跑胶检测，RNA条带非常亮，看不到DNA条带或者带很弱。样品提取之后曾使用RNase进行处理、使用常规方法提取后过柱子回收DNA、在提取过程中在CTAB温育之前进行RNase的处理等。该DNA样品含有很多RNA，需要处理掉RNA，但是其DNA对酶极其敏感，甚至沸水处理了半小时的RNase溶液加入样品中也可以造成DNA的降解，包括过柱子的方法也造成DNA的降解。

说明：该菌含多糖较多，生长缓慢

请高人指教！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-18 09:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4, MolEPI+1): Good! EDTA通过螯合金属离子，可以抑制包括DNA酶在内的很多酶的活性。 2011-08-10 23:21:48
小丹木木: 回帖置顶 2012-02-20 15:09:29
dna容易被降解多半因为有内原性的核酸酶没有去除，解决办法是楼上说的酚氯仿抽提，但真菌基因组较大，容易因该操作发生断裂，也可以在最后加一步蛋白酶K消化，体系中加入较多量的EDTA，因杂质性质的DNA酶多数需要金属离子做辅酶。
赞一下(3人) 回复此楼
How about the future？
9楼2011-08-10 23:08:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

追远0102

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 该死的玻璃杯 at 2011-05-18 09:00:30:
目的：从一种丝状真菌中提取DNA进行基因组测序。

问题：使用过多种方法进行提取（液氮研磨、珠打、玻璃棒研磨等）。提取最后样品加TE/水溶解后样品呈乳白色，看不到通常DNA的絮状沉淀。跑胶检测，RNA条带非常亮 ...

开学再读研，顶起，我也想知道
赞一下 回复此楼
逐步适应
2楼2011-05-18 11:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！ 2011-05-18 11:38:19
引用回帖:
Originally posted by 该死的玻璃杯 at 2011-05-18 09:00:30:
目的：从一种丝状真菌中提取DNA进行基因组测序。

问题：使用过多种方法进行提取（液氮研磨、珠打、玻璃棒研磨等）。提取最后样品加TE/水溶解后样品呈乳白色，看不到通常DNA的絮状沉淀。跑胶检测，RNA条带非常亮 ...

用TE溶解，本来就看不到DNA吧，你跑胶都看不到DNA，那你会不会是本来就没有DNA呢？
液氮研磨之后，用TE溶解，然后离心沉淀，去上清，用乙醇沉淀，再把沉淀跑电泳看有没有，之后再优化
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-05-18 11:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

springTT

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-05-18 14:39:16
我们实验室用玻璃珠法提真菌DNA，效果还不错。整个过程没有用到TE溶液，在最后加入RNase 37℃消化1h。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-18 11:55:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +5 Doleres 2026-03-19 5/250 2026-03-19 20:14 by 制度的
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 271材料工程求调剂 +6 .6lL 2026-03-18 6/300 2026-03-19 15:41 by haoshis
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +5 枫桥ZL 2026-03-18 7/350 2026-03-19 14:52 by 功夫疯狂
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸！ 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭