应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么DNA提取总降解
51/1返回列表
查看: 6680  |  回复: 15
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

该死的玻璃杯

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么DNA提取总降解

目的：从一种丝状真菌中提取DNA进行基因组测序。

问题：使用过多种方法进行提取（液氮研磨、珠打、玻璃棒研磨等）。提取最后样品加TE/水溶解后样品呈乳白色，看不到通常DNA的絮状沉淀。跑胶检测，RNA条带非常亮，看不到DNA条带或者带很弱。样品提取之后曾使用RNase进行处理、使用常规方法提取后过柱子回收DNA、在提取过程中在CTAB温育之前进行RNase的处理等。该DNA样品含有很多RNA，需要处理掉RNA，但是其DNA对酶极其敏感，甚至沸水处理了半小时的RNase溶液加入样品中也可以造成DNA的降解，包括过柱子的方法也造成DNA的降解。

说明：该菌含多糖较多，生长缓慢

请高人指教！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2011-05-18 09:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！ 2011-05-18 11:38:19
引用回帖:
Originally posted by 该死的玻璃杯 at 2011-05-18 09:00:30:
目的：从一种丝状真菌中提取DNA进行基因组测序。

问题：使用过多种方法进行提取（液氮研磨、珠打、玻璃棒研磨等）。提取最后样品加TE/水溶解后样品呈乳白色，看不到通常DNA的絮状沉淀。跑胶检测，RNA条带非常亮 ...

用TE溶解，本来就看不到DNA吧，你跑胶都看不到DNA，那你会不会是本来就没有DNA呢？
液氮研磨之后，用TE溶解，然后离心沉淀，去上清，用乙醇沉淀，再把沉淀跑电泳看有没有，之后再优化
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-05-18 11:23:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

追远0102

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 该死的玻璃杯 at 2011-05-18 09:00:30:
目的：从一种丝状真菌中提取DNA进行基因组测序。

问题：使用过多种方法进行提取（液氮研磨、珠打、玻璃棒研磨等）。提取最后样品加TE/水溶解后样品呈乳白色，看不到通常DNA的絮状沉淀。跑胶检测，RNA条带非常亮 ...

开学再读研，顶起，我也想知道
赞一下 回复此楼
逐步适应
2楼2011-05-18 11:18:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

springTT

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-05-18 14:39:16
我们实验室用玻璃珠法提真菌DNA，效果还不错。整个过程没有用到TE溶液，在最后加入RNase 37℃消化1h。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-18 11:55:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 是有些区别的 2011-05-18 14:39:37
真菌的没有提过，这种破菌后难道不用苯酚氯仿抽提的吗？一般不都是加苯酚氯仿抽提后，再加乙醇沉淀，然后溶解去RNA？
赞一下(1人) 回复此楼
在等待中涅槃重生
5楼2011-05-18 12:31:14
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭