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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么提取的DNA总是降解？
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xj871008

铁杆木虫 (著名写手)

升斗小民
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-08-19 11:25:09
所有提DNA的东西，包括枪头、离心管都得灭菌。另外问一下楼主是用液氮研磨的细胞吗，如果是我觉得像没研磨好，核膜没破，DNA没出来。个人见解，祝楼主好运。
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11楼2011-08-19 08:49:38
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by adslye at 2011-08-18 19:14:12:
gDNA降解无非两个原因：
1.细胞内DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前没有在细胞破碎的情况下放久吧？
2.机械力作用：有很剧烈的长时间涡旋吗？或者之类的。但一般也不会有事。

另外，至于PH，水饱和酚 ...

不是同一批次。应该不是操作的问题，实验室最近提DNA都不行，我一个师兄提了1000多份了，都没事，就最近总是出现这种问题，他用试剂盒也提过，4度放了一夜之后，跑胶就降解了。你看看还有没有别的可能性？
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时间是贼，偷走一切……
12楼2011-08-19 08:50:52
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silicare

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+2): 交流~交流~但提RNA的酚，DNA也应该是单一条带额。 2011-08-19 11:25:48
引用回帖:
6楼: Originally posted by adslye at 2011-08-18 19:14:12:
gDNA降解无非两个原因：
1.细胞内DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前没有在细胞破碎的情况下放久吧？
2.机械力作用：有很剧烈的长时间涡旋吗？或者之类的。但一般也不会有事。

另外，至于PH，水饱和酚 ...

DNA是不会跑到有机相的，只是在中间层，而且那也只是理论上，trizol提出的RNA都会有基因组，更何况楼主一个新手

而且DNA降解后电泳图是smear，也不是这样的一坨

他的图明显是提的RNA
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13楼2011-08-19 08:52:21
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silicare

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
对于楼主，还是要从商家那里问清楚了，到底给你的是水饱和的还是tris饱和的
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14楼2011-08-19 08:54:54
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by rioarsenal at 2011-08-18 21:52:24:
楼主提的什么材料，怎么粉碎的，是否加入了蛋白酶K来抑制内源性DNA酶？

用的动物耳组织，是剪碎的。加了蛋白酶K，过夜消化。不过蛋白酶K不是用来抑制内源性DNA酶的吧？请帮我想想还有没有别的原因呢？谢谢了~
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时间是贼，偷走一切……
15楼2011-08-19 08:55:00
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-08-19 08:33:33:
我做过用ctab法提取，并且实验试剂都是自己配的，不过我没有进行DNA电泳，直接后续实验，结果也很好，楼主可以试着后续实验，看看效果。

以前也没跑过胶，短片段可以扩增，稍长就不行了。谢谢您的建议，请帮我想想还有没有其他原因呢?
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时间是贼，偷走一切……
16楼2011-08-19 08:57:57
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zailixin

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+2): 好主意，祝顺利！ 2011-08-19 11:26:08
用试剂盒试试，如果还降价证明样品不行了。
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17楼2011-08-19 08:59:04
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xiaochun6093

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+1): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-19 11:26:21
试剂不要自己配，可以花点钱买现成的DNA抽提试剂盒，相对质量更有保证些，而且省时省力
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18楼2011-08-19 08:59:19
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xj871008 at 2011-08-19 08:49:38:
所有提DNA的东西，包括枪头、离心管都得灭菌。另外问一下楼主是用液氮研磨的细胞吗，如果是我觉得像没研磨好，核膜没破，DNA没出来。个人见解，祝楼主好运。

不是用液氮研磨的，用的是动物组织，剪碎的。应该不是消化的问题，加冰乙醇沉淀时候出来大量的絮状沉淀，不过这时候可能DNA已经成小片段了。请帮我想想还有没有别的原因呢，谢谢您的建议！
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时间是贼，偷走一切……
19楼2011-08-19 09:00:22
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adslye

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by 永不后悔2838 at 2011-08-19 08:50:52:
不是同一批次。应该不是操作的问题，实验室最近提DNA都不行，我一个师兄提了1000多份了，都没事，就最近总是出现这种问题，他用试剂盒也提过，4度放了一夜之后，跑胶就降解了。你看看还有没有别的可能性？

最后一步溶解的水没问题吧。点样的loading buffer等。
这个真不清楚了，因为我gDNA降解很少出现，出现重来也就没问题了。
不怕麻烦的话，所有试剂重新配过，再来一遍。
祝你好运吧。
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20楼2011-08-19 09:19:33
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