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xj871008

铁杆木虫 (著名写手)

升斗小民

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利! 2011-08-19 11:25:09
所有提DNA的东西,包括枪头、离心管都得灭菌。另外问一下楼主是用液氮研磨的细胞吗,如果是我觉得像没研磨好,核膜没破,DNA没出来。个人见解,祝楼主好运。
11楼2011-08-19 08:49:38
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by adslye at 2011-08-18 19:14:12:
gDNA降解无非两个原因:
1.细胞内DNA酶作用于gDNA,你的材料在放入提取液前没有在细胞破碎的情况下放久吧?
2.机械力作用:有很剧烈的长时间涡旋吗?或者之类的。但一般也不会有事。

另外,至于PH,水饱和酚 ...

不是同一批次。应该不是操作的问题,实验室最近提DNA都不行,我一个师兄提了1000多份了,都没事,就最近总是出现这种问题,他用试剂盒也提过,4度放了一夜之后,跑胶就降解了。你看看还有没有别的可能性?
时间是贼,偷走一切……
12楼2011-08-19 08:50:52
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 交流~交流~但提RNA的酚,DNA也应该是单一条带额。 2011-08-19 11:25:48
引用回帖:
6楼: Originally posted by adslye at 2011-08-18 19:14:12:
gDNA降解无非两个原因:
1.细胞内DNA酶作用于gDNA,你的材料在放入提取液前没有在细胞破碎的情况下放久吧?
2.机械力作用:有很剧烈的长时间涡旋吗?或者之类的。但一般也不会有事。

另外,至于PH,水饱和酚 ...

DNA是不会跑到有机相的,只是在中间层,而且那也只是理论上,trizol提出的RNA都会有基因组,更何况楼主一个新手

而且DNA降解后电泳图是smear,也不是这样的一坨

他的图明显是提的RNA
13楼2011-08-19 08:52:21
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
对于楼主,还是要从商家那里问清楚了,到底给你的是水饱和的还是tris饱和的
14楼2011-08-19 08:54:54
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by rioarsenal at 2011-08-18 21:52:24:
楼主提的什么材料,怎么粉碎的,是否加入了蛋白酶K来抑制内源性DNA酶?

用的动物耳组织,是剪碎的。加了蛋白酶K,过夜消化。不过蛋白酶K不是用来抑制内源性DNA酶的吧?请帮我想想还有没有别的原因呢?谢谢了~
时间是贼,偷走一切……
15楼2011-08-19 08:55:00
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-08-19 08:33:33:
我做过用ctab法提取,并且实验试剂都是自己配的,不过我没有进行DNA电泳,直接后续实验,结果也很好,楼主可以试着后续实验,看看效果。

以前也没跑过胶,短片段可以扩增,稍长就不行了。谢谢您的建议,请帮我想想还有没有其他原因呢?
时间是贼,偷走一切……
16楼2011-08-19 08:57:57
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zailixin

木虫 (著名写手)

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adslye(金币+2): 好主意,祝顺利! 2011-08-19 11:26:08
用试剂盒试试,如果还降价证明样品不行了。
17楼2011-08-19 08:59:04
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xiaochun6093

金虫 (小有名气)

★ ★
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adslye(金币+1): 感谢交流~祝顺利! 2011-08-19 11:26:21
试剂不要自己配,可以花点钱买现成的DNA抽提试剂盒,相对质量更有保证些,而且省时省力
18楼2011-08-19 08:59:19
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by xj871008 at 2011-08-19 08:49:38:
所有提DNA的东西,包括枪头、离心管都得灭菌。另外问一下楼主是用液氮研磨的细胞吗,如果是我觉得像没研磨好,核膜没破,DNA没出来。个人见解,祝楼主好运。

不是用液氮研磨的,用的是动物组织,剪碎的。应该不是消化的问题,加冰乙醇沉淀时候出来大量的絮状沉淀,不过这时候可能DNA已经成小片段了。请帮我想想还有没有别的原因呢,谢谢您的建议!
时间是贼,偷走一切……
19楼2011-08-19 09:00:22
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adslye

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by 永不后悔2838 at 2011-08-19 08:50:52:
不是同一批次。应该不是操作的问题,实验室最近提DNA都不行,我一个师兄提了1000多份了,都没事,就最近总是出现这种问题,他用试剂盒也提过,4度放了一夜之后,跑胶就降解了。你看看还有没有别的可能性?

最后一步溶解的水没问题吧。点样的loading buffer等。
这个真不清楚了,因为我gDNA降解很少出现,出现重来也就没问题了。
不怕麻烦的话,所有试剂重新配过,再来一遍。
祝你好运吧。
20楼2011-08-19 09:19:33
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