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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

[交流] 为什么提取的DNA总是降解?已有27人参与

各位大侠,为什么我提取的DNA总是降解呢?用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法,最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀,TE溶解过夜,琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图)。分光光度计检测浓度和纯度都正常。实验室几个人提取都是这样,不知道是什么原因,所用的试剂已经重新配过,还是这个结果。请问有没有遇到过类似情况的,这是什么原因,怎么解决呢?请大家指点帮助~


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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 交流~交流~但提RNA的酚,DNA也应该是单一条带额。 2011-08-19 11:25:48
引用回帖:
6楼: Originally posted by adslye at 2011-08-18 19:14:12:
gDNA降解无非两个原因:
1.细胞内DNA酶作用于gDNA,你的材料在放入提取液前没有在细胞破碎的情况下放久吧?
2.机械力作用:有很剧烈的长时间涡旋吗?或者之类的。但一般也不会有事。

另外,至于PH,水饱和酚 ...

DNA是不会跑到有机相的,只是在中间层,而且那也只是理论上,trizol提出的RNA都会有基因组,更何况楼主一个新手

而且DNA降解后电泳图是smear,也不是这样的一坨

他的图明显是提的RNA
13楼2011-08-19 08:52:21
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
注意你酚氯仿的PH值
2楼2011-08-18 14:27:01
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 永不后悔2838 at 2011-08-18 14:25:07:
各位大侠,为什么我提取的DNA总是降解呢?用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法,最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀,TE溶解过夜,琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图)。分光光度计检测浓度和纯度都正 ...

非常感谢,那个都是从公司买的,而且也换过不同的,结果还一样,请问还有别的可能吗?
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3楼2011-08-18 17:38:06
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by silicare at 2011-08-18 14:27:01:
注意你酚氯仿的PH值

非常感谢,那个都是从公司买的,而且也换过不同的,结果还一样,请问还有别的可能吗?
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4楼2011-08-18 17:39:01
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