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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么提取的DNA总是降解？
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

[交流] 为什么提取的DNA总是降解？ 已有27人参与

各位大侠，为什么我提取的DNA总是降解呢？用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法，最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀，TE溶解过夜，琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图）。分光光度计检测浓度和纯度都正常。实验室几个人提取都是这样，不知道是什么原因，所用的试剂已经重新配过，还是这个结果。请问有没有遇到过类似情况的，这是什么原因，怎么解决呢？请大家指点帮助~
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时间是贼，偷走一切……
1楼 2011-08-18 14:25:07
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by adslye at 2011-08-18 19:14:12:
gDNA降解无非两个原因：
1.细胞内DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前没有在细胞破碎的情况下放久吧？
2.机械力作用：有很剧烈的长时间涡旋吗？或者之类的。但一般也不会有事。

另外，至于PH，水饱和酚 ...

不是同一批次。应该不是操作的问题，实验室最近提DNA都不行，我一个师兄提了1000多份了，都没事，就最近总是出现这种问题，他用试剂盒也提过，4度放了一夜之后，跑胶就降解了。你看看还有没有别的可能性？
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时间是贼，偷走一切……
12楼2011-08-19 08:50:52
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
注意你酚氯仿的PH值
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2楼2011-08-18 14:27:01
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 永不后悔2838 at 2011-08-18 14:25:07:
各位大侠，为什么我提取的DNA总是降解呢？用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法，最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀，TE溶解过夜，琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图）。分光光度计检测浓度和纯度都正 ...

非常感谢，那个都是从公司买的，而且也换过不同的，结果还一样，请问还有别的可能吗？
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时间是贼，偷走一切……
3楼2011-08-18 17:38:06
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by silicare at 2011-08-18 14:27:01:
注意你酚氯仿的PH值

非常感谢，那个都是从公司买的，而且也换过不同的，结果还一样，请问还有别的可能吗？
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时间是贼，偷走一切……
4楼2011-08-18 17:39:01
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