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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么提取的DNA总是降解？
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adslye

银虫 (正式写手)
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引用回帖:
19楼: Originally posted by 永不后悔2838 at 2011-08-19 09:00:22:
不是用液氮研磨的，用的是动物组织，剪碎的。应该不是消化的问题，加冰乙醇沉淀时候出来大量的絮状沉淀，不过这时候可能DNA已经成小片段了。请帮我想想还有没有别的原因呢，谢谢您的建议！

大量絮状？看你凝胶条带不亮额。溶得很稀？
我做植物的，当我出现大量絮状都是因为多糖。gDNA一开始不会出现很多。动物我不知道会有哪些干扰物质。
另外，看silicare的提醒。我重看了你的胶。首先两块胶都不亮，尤其是下面的，marker都不亮。EB是不是加少了，还是胶放久了。
你marker是多少的。感觉你的条带都是隐约的两条。这样的话有可能是降解不完全的RNA。RNA18S大约1900，28s大约4700。你自己对照下。而这样有可能就是用错酚了。）
只能帮你分析这么多了。不过楼上有位建议不错：用新买试剂盒，能提出，说明现有试剂有问题（要不用错，要不过期）。不能提出，那就是样品在组织里已经降解。

[ Last edited by adslye on 2011-8-19 at 10:13 ]
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21楼2011-08-19 09:21:37
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
最前面的很亮的条带应该是RNA，可以用无DNase的RNaseA处理以后再看看。第一张图片的DNA应该是ok的，第二章有点问题，也可能是电泳效果不佳引起的。
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22楼2011-08-19 09:34:42
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科
★ ★ ★
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adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-19 11:24:38
从图片中可以看出，你没有加RNase，同样是你提取的DNA样品，加0.5微升的RNase，在65度放置10分钟，再进行电泳，相信结果肯定会比上面的图片好很多。其实你的DNA并没有降解的很严重。
上面也有人给你提了建议，我也认为你可以直接进行下一步的实验，如PCR等。如果做分子标记，你还是最好做一下纯化更好。
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转向地质微生物学
23楼2011-08-19 09:45:58
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802311820

金虫 (小有名气)
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adslye(金币+2): 鼓励新虫交流~祝顺利！ 2011-08-19 11:24:53
提取细菌也遇到过类似的问题，后来换了试剂盒就好了，一直想不明白原因。
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24楼2011-08-19 10:47:01
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quiller2000

木虫 (著名写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
多提几次吧，另外可能蛋白质是不是多了点儿；
还有走胶的细节要注意些；
此外RNA还比较多；
如果不是用来做文库之类的，简单的PCR是没有多少问题的。
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致良知
25楼2011-08-19 11:28:56
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yemuren

铁杆木虫 (正式写手)
★
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如果是作为模板P基因，这个样子是可以P出来的。
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我的专长叫做流浪，所以我就做了流氓~
26楼2011-08-19 15:04:54
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tigerhsu

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
其实你的DNA提取得很好，所谓的降解不过是共沉淀的RNA。
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27楼2012-02-17 12:36:27
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ma_xiaowen

木虫 (正式写手)
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如果提取出的真菌基因组跑胶条不清楚，而且测OD值也偏小，会对后面的实验有影响吗
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28楼2012-02-20 14:10:53
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水泗晶

金虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你看见的大量絮状物也有可能是杂质的，你萃取了几遍？你DNA溶完后是不是没有及时放进冰箱？我看你有块胶跑的条带有些乱，你的电流没有控制好
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29楼2012-03-23 18:53:46
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wansanlian

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是用什么方法提取的啊?有可能是机械用力的过猛也会造成这种脱尾的现象,还有就是可能你操作的时间过长,如果用的是CTAB法的话~
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乱花渐欲迷人眼
30楼2012-04-05 22:33:33
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