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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

[交流] 为什么提取的DNA总是降解?已有27人参与

各位大侠,为什么我提取的DNA总是降解呢?用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法,最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀,TE溶解过夜,琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图)。分光光度计检测浓度和纯度都正常。实验室几个人提取都是这样,不知道是什么原因,所用的试剂已经重新配过,还是这个结果。请问有没有遇到过类似情况的,这是什么原因,怎么解决呢?请大家指点帮助~


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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利! 2011-08-19 11:24:38
从图片中可以看出,你没有加RNase,同样是你提取的DNA样品,加0.5微升的RNase,在65度放置10分钟,再进行电泳,相信结果肯定会比上面的图片好很多。其实你的DNA并没有降解的很严重。
上面也有人给你提了建议,我也认为你可以直接进行下一步的实验,如PCR等。如果做分子标记,你还是最好做一下纯化更好。
转向地质微生物学
23楼2011-08-19 09:45:58
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
注意你酚氯仿的PH值
2楼2011-08-18 14:27:01
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 永不后悔2838 at 2011-08-18 14:25:07:
各位大侠,为什么我提取的DNA总是降解呢?用的是传统的苯酚-氯仿抽提的方法,最后一步加入冰乙醇沉淀的时候能看到大量的絮状沉淀,TE溶解过夜,琼脂糖胶检测时条带却是这样(如图)。分光光度计检测浓度和纯度都正 ...

非常感谢,那个都是从公司买的,而且也换过不同的,结果还一样,请问还有别的可能吗?
时间是贼,偷走一切……
3楼2011-08-18 17:38:06
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永不后悔2838

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by silicare at 2011-08-18 14:27:01:
注意你酚氯仿的PH值

非常感谢,那个都是从公司买的,而且也换过不同的,结果还一样,请问还有别的可能吗?
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4楼2011-08-18 17:39:01
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