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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提取的DNA纯度不好
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提取的DNA纯度不好 已有7人参与

最近一直在提细菌DNA,请问提取细菌DNA时需要无菌操作吗？提取的DNA，A260/A280总是大于2，有时比值都2.8,什么原因呢，刚开始用试剂盒提，比值1.1左右，后来用酚氯仿提取，比值却大于2，我是在超净工作台中操作的，有时会用酒精灯取样，难道因为温度太高使DNA降解太严重？
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1楼 2010-11-14 12:56:21
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by phyllislhy at 2010-11-14 15:51:22:
提取的时候不需要无菌操作，你提的DNA用试剂盒时是不是没有吹干就加水溶解，有机溶剂含量有点多，用酚氯仿提取DNA降解得很厉害，看你是做什么实验，一般的实验不需要追求1.8

不用无菌操作不会有外界杂菌干扰吗？我用的试剂盒是硅胶膜吸附的，最后一步DNA是用TE缓冲液把DNA从硅胶膜上洗脱下来的，好像不用吹干吧？我也不太清楚。还有就是酚氯仿提取的时候最后是用70%乙醇洗涤的，如果乙醇未干就加水溶解会不会对DNA的吸光度有影响？有怎样的影响呢？比值总大于2是代表DNA降解了吗？怎样预防降解？好多问题都不明白
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3楼2010-11-14 21:22:09
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phyllislhy

木虫 (正式写手)
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amisking(金币+2):good！ 2010-11-14 20:30:47
提取的时候不需要无菌操作，你提的DNA用试剂盒时是不是没有吹干就加水溶解，有机溶剂含量有点多，用酚氯仿提取DNA降解得很厉害，看你是做什么实验，一般的实验不需要追求1.8
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2楼2010-11-14 15:51:22
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pushizi

木虫 (小有名气)

pushizi
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-15 08:48:36
防止杂菌是因为你要培养，你提基因组时菌都死翘翘了，就是把里面的东西释放出来而已~杂菌没有关系的，除非你空气中漂浮着很多菌，混入你提的东西里，但是那也是占很少量的~
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但愿快乐不停歇，悲伤不再来~
4楼2010-11-14 22:38:50
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by pushizi at 2010-11-14 22:38:50:
防止杂菌是因为你要培养，你提基因组时菌都死翘翘了，就是把里面的东西释放出来而已~杂菌没有关系的，除非你空气中漂浮着很多菌，混入你提的东西里，但是那也是占很少量的~

我是要从鱼肉中提取细菌DNA的，不无菌操作的话我怀疑外界的微生物会产生干扰，因为我是分析鱼肉中微生物多样性的。
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5楼2010-11-14 23:25:57
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yqhc

金虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-15 08:48:46
a280偏高，可能是蛋白没有去除，注意dna沉淀步骤操作
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6楼2010-11-15 07:52:15
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peizhilee

金虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-15 08:48:53
还是要无菌操作的，混入很少的其他外源基因组DNA，很可能就会影响到实验结果。
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一念成魔，一念成佛
7楼2010-11-15 08:45:10
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xuguanghai

木虫 (职业作家)
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引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-14 12:56:21:
最近一直在提细菌DNA,请问提取细菌DNA时需要无菌操作吗？提取的DNA，A260/A280总是大于2，有时比值都2.8,什么原因呢，刚开始用试剂盒提，比值1.1左右，后来用酚氯仿提取，比值却大于2，我是在超净工作台中操作的， ...

A260/A280总是大于2,是不是没有加RNA酶啊，还有用硅胶膜提取的话，纯度好像是比较低
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8楼2010-11-15 08:57:27
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2010-11-15 08:57:27:


A260/A280总是大于2,是不是没有加RNA酶啊，还有用硅胶膜提取的话，纯度好像是比较低

用硅胶膜提取纯度在1.1左右，我下一步是做PCR，这样的纯度会影响下一步实验结果吗
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9楼2010-11-15 21:30:45
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xuguanghai

木虫 (职业作家)
★
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OD值在1.1应该是有蛋白质污染
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10楼2010-11-16 08:26:55
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