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wsc0451

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有没有人做过用水煮法提取DNA的啊,望赐教 已有19人参与

本人提细菌DNA基因组,由于对DNA纯度的要求不高,故想通过经济简便的方法提取(之前用试剂盒提,但比较贵),但经过网上找的水煮法流程试验了两次,都没成功(跑电泳都没跑出来),不知道这个方法到底可行不可行。。。

我是这么做的:菌液离心后去掉清液,EP管底部有菌体,加灭菌ddH2O(600微升左右吧),然后沸水浴蒸煮10分钟,再离心,取上清液。。。。理论上DNA就应该溶于水中,但结果。。。悲剧啊。。望赐教~~最近导师催的紧,望各位虫友帮帮忙
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立意要高,做事要实
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wwllkkhh

金虫 (小有名气)

wsc0451(金币+1): 2010-04-26 22:00
可以的,不过要加氯仿、异戊醇、异丙醇进行洗脱才能得到纯净的DNA
牛~逼~哄~哄
4楼2010-04-26 21:49:27
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普通回帖

郑B.CoA

金虫 (正式写手)

话说蛋白质也溶于水吧..
2楼2010-04-26 21:05:12
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Science298

铜虫 (正式写手)

wsc0451(金币+1): 2010-04-26 21:59
用5%的氢氧化钠煮
3楼2010-04-26 21:35:20
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wsc0451

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wwllkkhh at 2010-04-26 21:49:27:
可以的,不过要加氯仿、异戊醇、异丙醇进行洗脱才能得到纯净的DNA

如果不洗脱的话那应该DNA还是有的是吧,只是不纯而已,另外你说的洗脱就是指加试剂然后离心吗?
立意要高,做事要实
5楼2010-04-26 22:02:32
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馨沁

木虫 (小有名气)

★
1949stone(金币+1): 2010-04-27 08:51
1949stone(金币+1): 2010-04-27 08:51
1949stone(金币+1): 2010-04-27 08:51
1949stone(金币-2):有延迟 只加一个金币 抱歉 2010-04-27 08:53
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lstt09nk(金币+4):网络问题,把金币补加回来,望虫友谅解~~ 2010-04-29 15:49
你的菌是阳性菌还是阴性菌,一般阳性菌水煮效果就不好
6楼2010-04-27 08:51:16
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士

这个。。。恩~感觉提DNA也花不了多少钱吧。。。没有必要用水煮,细菌的DNA不是很难提。。。个人认为酚等除蛋白还是必须的~总共试剂也就一百多块钱能用到你毕业
不孝有三,读博为大!
7楼2010-04-27 09:22:14
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j2

木虫 (正式写手)

wsc0451(金币+1): 2010-04-28 16:40
水煮法DNA要用电泳跑出来有点困难吧。都是直接pcr
修炼ing,当虫仙……
8楼2010-04-27 15:30:56
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gaiyf

金虫 (正式写手)

★
wsc0451(金币+4): 2010-04-28 16:41
lstt09nk: 2010-04-29 15:49
lstt09nk(金币+1):热心虫友~~ 2010-04-29 15:50
关于细菌DNA的提取,最好还是用反复煮沸和冻融法最好,单纯的煮沸效果不佳。具体方法是:将菌体收集加无菌水后,先用液氮冷冻(一定要冻实),然后放到沸水浴中煮沸3-5分钟,如此反复三次,再进行离心和后续提取DNA的操作。
我这里有成套的方法,我们实验室已经用得很成熟了,如果你需要可以联系我。
gaiyf@yahoo.cn
多看文献,多学知识
9楼2010-04-27 16:25:41
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我和我自己

铁虫 (小有名气)

用CTAB法呗,也花不了什么钱……一些普通试剂,氯仿异戊醇乙醇
10楼2010-04-27 17:18:25
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