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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有没有人做过用水煮法提取DNA的啊，望赐教
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wsc0451

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有没有人做过用水煮法提取DNA的啊，望赐教已有19人参与

本人提细菌DNA基因组，由于对DNA纯度的要求不高，故想通过经济简便的方法提取（之前用试剂盒提，但比较贵），但经过网上找的水煮法流程试验了两次，都没成功（跑电泳都没跑出来），不知道这个方法到底可行不可行。。。

我是这么做的：菌液离心后去掉清液，EP管底部有菌体，加灭菌ddH2O（600微升左右吧）,然后沸水浴蒸煮10分钟，再离心，取上清液。。。。理论上DNA就应该溶于水中，但结果。。。悲剧啊。。望赐教~~最近导师催的紧，望各位虫友帮帮忙
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立意要高，做事要实
1楼2010-04-26 20:47:49
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wwllkkhh

金虫 (小有名气)
wsc0451(金币+1): 2010-04-26 22:00
可以的，不过要加氯仿、异戊醇、异丙醇进行洗脱才能得到纯净的DNA
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牛~逼~哄~哄
4楼2010-04-26 21:49:27
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普通回帖

郑B.CoA

金虫 (正式写手)
话说蛋白质也溶于水吧..
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2楼2010-04-26 21:05:12
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Science298

铜虫 (正式写手)
wsc0451(金币+1): 2010-04-26 21:59
用5%的氢氧化钠煮
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3楼2010-04-26 21:35:20
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wsc0451

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wwllkkhh at 2010-04-26 21:49:27:
可以的，不过要加氯仿、异戊醇、异丙醇进行洗脱才能得到纯净的DNA

如果不洗脱的话那应该DNA还是有的是吧，只是不纯而已，另外你说的洗脱就是指加试剂然后离心吗？
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立意要高，做事要实
5楼2010-04-26 22:02:32
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馨沁

木虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-27 08:51
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1949stone(金币-2):有延迟 只加一个金币 抱歉 2010-04-27 08:53
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1949stone(金币-2):有延迟 只加一个金币 抱歉 2010-04-27 08:53
lstt09nk(金币+4):网络问题，把金币补加回来，望虫友谅解~~ 2010-04-29 15:49
你的菌是阳性菌还是阴性菌，一般阳性菌水煮效果就不好
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6楼2010-04-27 08:51:16
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
这个。。。恩~感觉提DNA也花不了多少钱吧。。。没有必要用水煮，细菌的DNA不是很难提。。。个人认为酚等除蛋白还是必须的~总共试剂也就一百多块钱能用到你毕业
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不孝有三，读博为大！
7楼2010-04-27 09:22:14
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j2

木虫 (正式写手)
wsc0451(金币+1): 2010-04-28 16:40
水煮法DNA要用电泳跑出来有点困难吧。都是直接pcr
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
8楼2010-04-27 15:30:56
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gaiyf

金虫 (正式写手)
★
wsc0451(金币+4): 2010-04-28 16:41
lstt09nk: 2010-04-29 15:49
lstt09nk(金币+1):热心虫友~~ 2010-04-29 15:50
关于细菌DNA的提取，最好还是用反复煮沸和冻融法最好，单纯的煮沸效果不佳。具体方法是：将菌体收集加无菌水后，先用液氮冷冻（一定要冻实），然后放到沸水浴中煮沸3-5分钟，如此反复三次，再进行离心和后续提取DNA的操作。
我这里有成套的方法，我们实验室已经用得很成熟了，如果你需要可以联系我。
gaiyf@yahoo.cn
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多看文献，多学知识
9楼2010-04-27 16:25:41
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我和我自己

铁虫 (小有名气)
用CTAB法呗，也花不了什么钱……一些普通试剂，氯仿异戊醇乙醇
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10楼2010-04-27 17:18:25
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