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rjghx

新虫 (初入文坛)

[求助] 在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下,提DNA 的高手请进！！！

在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下！！！
提取对象为：植物核果的去核干燥果实
方法：CTAB法及SDS法。
药材数量：4g，大量粗提取。
在提取的过程中到没有什么异常出现，但最后一步用乙醇或异丙醇沉淀时，出现了大量胶状沉淀,按常规会判断为多糖，但在电泳后发现板孔附近并没有多糖的亮点，同时DNA的条带也是一点都没有，这个实验我试了很多方法，CTAB法，SDS法，大量提取，微量提取。也参考文献试了很多改良的方法，都没有得到DNA的条带。请问各位有什么高见？
附上照片，用5ml及1.5ml离心管做。
此图分别为用醇沉淀瞬间出现的大量胶状沉淀。
离心沉淀。
用75醇洗涤后转入1.5 离心管。
电泳示意图。
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1楼 2011-07-20 11:03:59
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

healerly

禁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-20 20:32:46
你胶孔中很干净，说明抽提的很干净~~
这一方面我也不是很懂，我只是研一而已~~
我有几个想法，你可以考虑一下，我不是这方面的专家，只能算热心了~~呵呵~~不知道能不能帮上忙啊~~
1，显然你提DNA的样品差别太大了，叶子和果实与干果差别有点大把，干果中水分含的很少，如果再按照原先的方法在处理上是不是应该改进一下？
2，CTAB在65℃水浴4个小时，有点长把~~~基因组会不会降解呢？我这边是水浴时间不能太长，太长了基因组会降解。
3，继续查查有没有做这方面的文献吧~~~
加油~~
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heal the world！！！
5楼2011-07-20 20:30:24
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)
我是来学习大家的技术的
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9楼2011-07-30 22:30:13
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普通回帖

healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 鼓励交流 2011-07-20 16:27:57
本帖内容被屏蔽
2楼2011-07-20 11:18:35
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rjghx

新虫 (初入文坛)
我用的也有CTAB法，我先用液氮研磨成细粉，大概5-6次，再用提取缓冲液（0.25mol Nacl  ，0.25mol Tris， 50mmol EDTA， 调PH=8.0）冰浴一小时，而后用 2×CTAB提取缓冲液65℃水浴4小时。氯仿异戊醇除杂5次（事实上五次后还有杂质，我试过一直除杂，就一直都有）。无水乙醇加醋酸钾沉淀。
我们用同样的方法对叶子及鲜果提取都有结果，唯独对干燥果实一点用也没有，并且不知道大量出现的胶状沉淀是什么？
附上跑板图，你参谋一下.......
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3楼2011-07-20 16:02:04
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rjghx

新虫 (初入文坛)
我做的也是微量的，只是不出结果，用0.2g的提，跑完后还是空板一张，因为怀疑含量太少，所以就试着用大量的去提取，只求能提出来！
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4楼2011-07-20 16:06:25
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zhoujunbo

新虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励！ 2011-07-21 11:37:11
我可以告诉你，你是把多糖和果胶提取出来了!!另外，65读水浴4小时？通常30分钟足矣，为什么用4小时，DNA早降解了。
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6楼2011-07-20 22:13:01
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rjghx

新虫 (初入文坛)
恩，既然抽提的挺干净，那出现的大量沉淀又是什么呢？看文献时好像看到海藻的提取方法中有一个LICL沉淀法，不知你们试过没？
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7楼2011-07-21 09:14:49
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mlw0927

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-07-23 17:14:54
水浴时间太长，通常0.5-1h最好，不然出来的全是杂质，另外，你的提取液怎么有点粉红色，是不是被氧化的原因
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养在窗台上，梦想着海洋~
8楼2011-07-23 16:17:04
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我和我自己

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

CTAB水浴时间太长了吧，我们就是水浴40min，每十分钟上下颠倒一次，以充分接触
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10楼2011-08-01 16:10:31
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