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rjghx

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[求助] 在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下,提DNA 的高手请进！！！

在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下！！！
提取对象为：植物核果的去核干燥果实
方法：CTAB法及SDS法。
药材数量：4g，大量粗提取。
在提取的过程中到没有什么异常出现，但最后一步用乙醇或异丙醇沉淀时，出现了大量胶状沉淀,按常规会判断为多糖，但在电泳后发现板孔附近并没有多糖的亮点，同时DNA的条带也是一点都没有，这个实验我试了很多方法，CTAB法，SDS法，大量提取，微量提取。也参考文献试了很多改良的方法，都没有得到DNA的条带。请问各位有什么高见？
附上照片，用5ml及1.5ml离心管做。
此图分别为用醇沉淀瞬间出现的大量胶状沉淀。
离心沉淀。
用75醇洗涤后转入1.5 离心管。
电泳示意图。

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1楼2011-07-20 11:03:59

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rjghx

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我做的也是微量的，只是不出结果，用0.2g的提，跑完后还是空板一张，因为怀疑含量太少，所以就试着用大量的去提取，只求能提出来！

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4楼2011-07-20 16:06:25

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healerly

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★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 鼓励交流 2011-07-20 16:27:57

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2楼2011-07-20 11:18:35

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rjghx

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我用的也有CTAB法，我先用液氮研磨成细粉，大概5-6次，再用提取缓冲液（0.25mol Nacl ，0.25mol Tris， 50mmol EDTA，调PH=8.0）冰浴一小时，而后用 2×CTAB提取缓冲液65℃水浴4小时。氯仿异戊醇除杂5次（事实上五次后还有杂质，我试过一直除杂，就一直都有）。无水乙醇加醋酸钾沉淀。
我们用同样的方法对叶子及鲜果提取都有结果，唯独对干燥果实一点用也没有，并且不知道大量出现的胶状沉淀是什么？
附上跑板图，你参谋一下.......

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3楼2011-07-20 16:02:04

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healerly

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【答案】应助回帖

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amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-20 20:32:46

你胶孔中很干净，说明抽提的很干净~~
这一方面我也不是很懂，我只是研一而已~~
我有几个想法，你可以考虑一下，我不是这方面的专家，只能算热心了~~呵呵~~不知道能不能帮上忙啊~~
1，显然你提DNA的样品差别太大了，叶子和果实与干果差别有点大把，干果中水分含的很少，如果再按照原先的方法在处理上是不是应该改进一下？
2，CTAB在65℃水浴4个小时，有点长把~~~基因组会不会降解呢？我这边是水浴时间不能太长，太长了基因组会降解。
3，继续查查有没有做这方面的文献吧~~~