24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

rjghx

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 18
帖子: 6
在线: 2.2小时
虫号: 1337364
注册: 2011-07-04
性别: MM
专业: 植物遗传学

[求助] 在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下,提DNA 的高手请进！！！

在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下！！！
提取对象为：植物核果的去核干燥果实
方法：CTAB法及SDS法。
药材数量：4g，大量粗提取。
在提取的过程中到没有什么异常出现，但最后一步用乙醇或异丙醇沉淀时，出现了大量胶状沉淀,按常规会判断为多糖，但在电泳后发现板孔附近并没有多糖的亮点，同时DNA的条带也是一点都没有，这个实验我试了很多方法，CTAB法，SDS法，大量提取，微量提取。也参考文献试了很多改良的方法，都没有得到DNA的条带。请问各位有什么高见？
附上照片，用5ml及1.5ml离心管做。
此图分别为用醇沉淀瞬间出现的大量胶状沉淀。
离心沉淀。
用75醇洗涤后转入1.5 离心管。
电泳示意图。

回复此楼

1楼2011-07-20 11:03:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhoujunbo

新虫 (知名作家)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 426.1
红花: 3
帖子: 6074
在线: 566.2小时
虫号: 382264
注册: 2007-05-25
性别: GG
专业: 果树学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励！ 2011-07-21 11:37:11

我可以告诉你，你是把多糖和果胶提取出来了!!另外，65读水浴4小时？通常30分钟足矣，为什么用4小时，DNA早降解了。

赞一下(1人)

回复此楼

6楼2011-07-20 22:13:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 16 个回答

healerly

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 鼓励交流 2011-07-20 16:27:57

本帖内容被屏蔽

2楼2011-07-20 11:18:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

rjghx

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 18
帖子: 6
在线: 2.2小时
虫号: 1337364
注册: 2011-07-04
性别: MM
专业: 植物遗传学

我用的也有CTAB法，我先用液氮研磨成细粉，大概5-6次，再用提取缓冲液（0.25mol Nacl ，0.25mol Tris， 50mmol EDTA，调PH=8.0）冰浴一小时，而后用 2×CTAB提取缓冲液65℃水浴4小时。氯仿异戊醇除杂5次（事实上五次后还有杂质，我试过一直除杂，就一直都有）。无水乙醇加醋酸钾沉淀。
我们用同样的方法对叶子及鲜果提取都有结果，唯独对干燥果实一点用也没有，并且不知道大量出现的胶状沉淀是什么？
附上跑板图，你参谋一下.......

赞一下

回复此楼

3楼2011-07-20 16:02:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖