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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提取的DNA纯度不好 已有7人参与

最近一直在提细菌DNA,请问提取细菌DNA时需要无菌操作吗?提取的DNA,A260/A280总是大于2,有时比值都2.8,什么原因呢,刚开始用试剂盒提,比值1.1左右,后来用酚氯仿提取,比值却大于2,我是在超净工作台中操作的,有时会用酒精灯取样,难道因为温度太高使DNA降解太严重?
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peizhilee

金虫 (小有名气)

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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-15 08:48:53
还是要无菌操作的,混入很少的其他外源基因组DNA,很可能就会影响到实验结果。
一念成魔,一念成佛
7楼2010-11-15 08:45:10
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phyllislhy

木虫 (正式写手)

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amisking(金币+2):good! 2010-11-14 20:30:47
提取的时候不需要无菌操作,你提的DNA用试剂盒时是不是没有吹干就加水溶解,有机溶剂含量有点多,用酚氯仿提取DNA降解得很厉害,看你是做什么实验,一般的实验不需要追求1.8
2楼2010-11-14 15:51:22
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by phyllislhy at 2010-11-14 15:51:22:
提取的时候不需要无菌操作,你提的DNA用试剂盒时是不是没有吹干就加水溶解,有机溶剂含量有点多,用酚氯仿提取DNA降解得很厉害,看你是做什么实验,一般的实验不需要追求1.8

不用无菌操作不会有外界杂菌干扰吗?我用的试剂盒是硅胶膜吸附的,最后一步DNA是用TE缓冲液把DNA从硅胶膜上洗脱下来的,好像不用吹干吧?我也不太清楚。还有就是酚氯仿提取的时候最后是用70%乙醇洗涤的,如果乙醇未干就加水溶解会不会对DNA的吸光度有影响?有怎样的影响呢?比值总大于2是代表DNA降解了吗?怎样预防降解?好多问题都不明白
3楼2010-11-14 21:22:09
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pushizi

木虫 (小有名气)

pushizi

★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-15 08:48:36
防止杂菌是因为你要培养,你提基因组时菌都死翘翘了,就是把里面的东西释放出来而已~杂菌没有关系的,除非你空气中漂浮着很多菌,混入你提的东西里,但是那也是占很少量的~
但愿快乐不停歇,悲伤不再来~
4楼2010-11-14 22:38:50
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