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shawne2008

木虫 (著名写手)

木虫反贪局局长

[交流] 【求助/交流】真菌提取基因组DNA的方法已有7人参与

近来做耐盐菌筛选，已经做到提取DNA测序的阶段了，可是破壁的问题却一直不理想，几种方法都试过，可是效果不好，不知大家有什么方法和经验提供一下，谢谢！！！
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1楼2010-05-28 23:29:19
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
液氮研磨 CTAB法提取
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-28 23:37:36
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shawne2008

木虫 (著名写手)

木虫反贪局局长
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-28 23:37:36:
液氮研磨 CTAB法提取

请具体一点
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3楼2010-05-28 23:57:32
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nklyw

木虫 (正式写手)
shawne2008(金币+10): 2010-05-29 00:10:05
1. 将样品放在灭过菌的研钵中，加入液氮捣碎，迅速转入1.5ml离心管中，加入600mlCTAB（或同时加入石英砂和CTAB研磨，然 后转入1.5ml离心管中）；
2. 65℃水浴1h（每20min反转摇匀一次）；
3. 加等体积的氯仿－异戊醇（体积比24：1），或加入苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀；
4. 6500rpm离心30min，取上清于新管中；
5. 重复4，5步骤；
6. 向上清中加入2倍体积的无水乙醇（或2/3体积的异丙醇）沉淀DNA，-20℃放置20min或更长时间，或过夜；
7. 加75％的乙醇清洗DNA，每次12000rpm 2min，去上清；
8. 风干后加入40ul的TE缓冲液溶解DNA；
9. 取2ul溶液电泳检测。
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4楼2010-05-29 00:04:30
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ltakashi

银虫 (小有名气)
同意楼上的
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5楼2010-05-29 09:54:19
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austin2008

铁杆木虫 (著名写手)
用玻璃珠法呀！
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优秀是一种习惯;生命是一种过程;放弃是一种智慧;缺点是一种恩惠!
6楼2010-05-29 17:52:17
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莲池梵音

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用树脂
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非特约观察员
7楼2010-06-09 17:43:24
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sjfty

铜虫 (小有名气)
CTAB法
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8楼2012-04-27 21:31:43
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