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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 丝状真菌基因组提取
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喇叭

新虫 (初入文坛)

[求助] 丝状真菌基因组提取

各位经验人士：
    我是做丝状真菌方面的分子实验，但是我所提取的基因组一般浓度都很低，但也不知道是什么方面的原因，完全是按试剂盒的步骤来的，因为接下来要做southern blot ，但是所提取的基因组浓度又很低，电泳的时候只有很淡的一条带，酶切电泳结果什么也没有，所以很着急，因为在基因组方面实在是有缺陷，跪求大家的帮助，谢谢各位了
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1楼 2011-06-29 14:28:28
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-29 16:38:30
喇叭(金币+1): 谢谢指导 2011-07-04 13:32:11
影响DNA提取浓度的原因比较多，比如菌丝的磨碎程度，菌丝的培养时间，菌丝量和裂解液的比例等等，可以同时多提几管，提出来以后把几管的DNA混在一起，看看浓度能否提高！
祝顺利！
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2楼2011-06-29 15:29:03
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 也许吧 2011-06-29 19:01:01
最可能的原因：就是你加液氮后研磨的不够！
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2011-06-29 16:45:42
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wulei0708

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励分享经验 2011-06-29 19:01:19
可以用机械破胞法提取真菌DNA，方法简单快捷，我每次提取的DNA浓度还是比较高的。你科研试一下。
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4楼2011-06-29 18:42:08
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 喇叭 at 2011-06-29 14:28:28:
各位经验人士：
    我是做丝状真菌方面的分子实验，但是我所提取的基因组一般浓度都很低，但也不知道是什么方面的原因，完全是按试剂盒的步骤来的，因为接下来要做southern blot ，但是所提取的基因组浓度又很低 ...

从固体斜面上获得的菌丝可能量不是够多，可以把菌丝放在液体培养基里扩大培养，这样取得的提取基因组的原材料就够多了，然后把培养物离心收集，可以稍稍烘干或用其他方法弄干，尽量少含液体水份，取足够的量如0.5g培养物，用液氮研磨，剩下的就可以用CTAB法去提取了，（做杂交的模板不要吹的太干了，可以先酶切看看能不能切的很好），浓度低可能是菌丝太少，研磨研磨就没有了或是菌丝太湿水分过多等原因吧~
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5楼2011-06-29 20:39:44
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tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 喇叭 at 2011-06-29 14:28:28:
各位经验人士：
    我是做丝状真菌方面的分子实验，但是我所提取的基因组一般浓度都很低，但也不知道是什么方面的原因，完全是按试剂盒的步骤来的，因为接下来要做southern blot ，但是所提取的基因组浓度又很低 ...

说说我的经验，大量菌丝研磨，正常操作，最后在加入等体积的异丙醇后自然会有一大坨DNA，勾出来用70%酒精洗洗，完事，比什么试剂盒要好多了！
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阳光总在风雨后
6楼2011-06-30 00:09:53
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happygjx

木虫 (小有名气)
同学，请问你的问题解决了没有，我最近也是遇见这种情况，想从你那取点经
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7楼2013-03-07 11:43:16
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xixicau

新虫 (初入文坛)
有人做过桃褐腐的southern 杂交吗？用各种提DNA的方法，获得的基因组dna在400-1000之间，BamH1酶切总是切不开。37°C过夜酶切后，基因组条带还在。酶切体系：3ul BamH1酶；DNA 15-20ul（约8ug）；buffer 3ul，总体积30ul。这是为什么呢？
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8楼2014-08-27 09:15:21
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