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喇叭

新虫 (初入文坛)

[求助] 丝状真菌基因组提取

各位经验人士:
    我是做丝状真菌方面的分子实验,但是我所提取的基因组一般浓度都很低,但也不知道是什么方面的原因,完全是按试剂盒的步骤来的,因为接下来要做southern blot ,但是所提取的基因组浓度又很低,电泳的时候只有很淡的一条带,酶切电泳结果什么也没有,所以很着急,因为在基因组方面实在是有缺陷,跪求大家的帮助,谢谢各位了
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 喇叭 at 2011-06-29 14:28:28:
各位经验人士:
    我是做丝状真菌方面的分子实验,但是我所提取的基因组一般浓度都很低,但也不知道是什么方面的原因,完全是按试剂盒的步骤来的,因为接下来要做southern blot ,但是所提取的基因组浓度又很低 ...

从固体斜面上获得的菌丝可能量不是够多,可以把菌丝放在液体培养基里扩大培养,这样取得的提取基因组的原材料就够多了,然后把培养物离心收集,可以稍稍烘干或用其他方法弄干,尽量少含液体水份,取足够的量如0.5g培养物,用液氮研磨,剩下的就可以用CTAB法去提取了,(做杂交的模板不要吹的太干了,可以先酶切看看能不能切的很好),浓度低可能是菌丝太少,研磨研磨就没有了或是菌丝太湿水分过多等原因吧~
5楼2011-06-29 20:39:44
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-29 16:38:30
喇叭(金币+1): 谢谢指导 2011-07-04 13:32:11
影响DNA提取浓度的原因比较多,比如菌丝的磨碎程度,菌丝的培养时间,菌丝量和裂解液的比例等等,可以同时多提几管,提出来以后把几管的DNA混在一起,看看浓度能否提高!
祝顺利!
2楼2011-06-29 15:29:03
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 也许吧 2011-06-29 19:01:01
最可能的原因:就是你加液氮后研磨的不够!
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2011-06-29 16:45:42
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wulei0708

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励分享经验 2011-06-29 19:01:19
可以用机械破胞法提取真菌DNA,方法简单快捷,我每次提取的DNA浓度还是比较高的。你科研试一下。
4楼2011-06-29 18:42:08
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