24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1929  |  回复: 7

喇叭

新虫 (初入文坛)

[求助] 丝状真菌基因组提取

各位经验人士:
    我是做丝状真菌方面的分子实验,但是我所提取的基因组一般浓度都很低,但也不知道是什么方面的原因,完全是按试剂盒的步骤来的,因为接下来要做southern blot ,但是所提取的基因组浓度又很低,电泳的时候只有很淡的一条带,酶切电泳结果什么也没有,所以很着急,因为在基因组方面实在是有缺陷,跪求大家的帮助,谢谢各位了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-29 16:38:30
喇叭(金币+1): 谢谢指导 2011-07-04 13:32:11
影响DNA提取浓度的原因比较多,比如菌丝的磨碎程度,菌丝的培养时间,菌丝量和裂解液的比例等等,可以同时多提几管,提出来以后把几管的DNA混在一起,看看浓度能否提高!
祝顺利!
2楼2011-06-29 15:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 也许吧 2011-06-29 19:01:01
最可能的原因:就是你加液氮后研磨的不够!
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2011-06-29 16:45:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulei0708

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励分享经验 2011-06-29 19:01:19
可以用机械破胞法提取真菌DNA,方法简单快捷,我每次提取的DNA浓度还是比较高的。你科研试一下。
4楼2011-06-29 18:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 喇叭 at 2011-06-29 14:28:28:
各位经验人士:
    我是做丝状真菌方面的分子实验,但是我所提取的基因组一般浓度都很低,但也不知道是什么方面的原因,完全是按试剂盒的步骤来的,因为接下来要做southern blot ,但是所提取的基因组浓度又很低 ...

从固体斜面上获得的菌丝可能量不是够多,可以把菌丝放在液体培养基里扩大培养,这样取得的提取基因组的原材料就够多了,然后把培养物离心收集,可以稍稍烘干或用其他方法弄干,尽量少含液体水份,取足够的量如0.5g培养物,用液氮研磨,剩下的就可以用CTAB法去提取了,(做杂交的模板不要吹的太干了,可以先酶切看看能不能切的很好),浓度低可能是菌丝太少,研磨研磨就没有了或是菌丝太湿水分过多等原因吧~
5楼2011-06-29 20:39:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 喇叭 at 2011-06-29 14:28:28:
各位经验人士:
    我是做丝状真菌方面的分子实验,但是我所提取的基因组一般浓度都很低,但也不知道是什么方面的原因,完全是按试剂盒的步骤来的,因为接下来要做southern blot ,但是所提取的基因组浓度又很低 ...

说说我的经验,大量菌丝研磨,正常操作,最后在加入等体积的异丙醇后自然会有一大坨DNA,勾出来用70%酒精洗洗,完事,比什么试剂盒要好多了!
阳光总在风雨后
6楼2011-06-30 00:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happygjx

木虫 (小有名气)

同学,请问你的问题解决了没有,我最近也是遇见这种情况,想从你那取点经
7楼2013-03-07 11:43:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xixicau

新虫 (初入文坛)

有人做过桃褐腐的southern 杂交吗?用各种提DNA的方法,获得的基因组dna在400-1000之间,BamH1酶切总是切不开。37°C过夜酶切后,基因组条带还在。酶切体系:3ul BamH1酶;DNA 15-20ul(约8ug);buffer 3ul,总体积30ul。这是为什么呢?
8楼2014-08-27 09:15:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 喇叭 的主题更新
信息提示
请填处理意见