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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yuyan225

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】做真菌异源表达的表达序列是否可从基因组上扩

如题,最近即将开始做真菌异源表达,表达的基因也是来源于真菌,想问一下各位虫友,从基因组上扩的该片段能否连于表达载体,用于后续实验?(最近做的原核表达和酵母表达用的片段都是从cDNA上扩的,不知来源于基因组的片段与cDNA的片段用于表达,有何不同之处?望高手指点~~)
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1986

铁杆木虫 (知名作家)



yuyan225(金币+1):谢谢参与
这个我真不知道,碰巧过来,给你顶帖吧。
2楼2011-04-14 16:36:06
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yuyan225

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 1986 at 2011-04-14 16:36:06:
这个我真不知道,碰巧过来,给你顶帖吧。

谢谢!
4楼2011-04-14 17:01:12
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yuyan225(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by yuyan225 at 2011-04-14 16:24:51:
如题,最近即将开始做真菌异源表达,表达的基因也是来源于真菌,想问一下各位虫友,从基因组上扩的该片段能否连于表达载体,用于后续实验?(最近做的原核表达和酵母表达用的片段都是从cDNA上扩的,不知来源于基因 ...

运气非常好的情况下可以!真核生物的基因是断裂基因,有内含子,你从基因组上直接扩增的好一般是含有内含子的,你克隆到载体上一般不能表达或者表达了也不是你要的东西。而cDNA不一样,是逆转录后剪接了的,只有编码序列,没有内含子
。所以你运气非常好的情况下,即扩增的基因正好没有内含子的情况下,可以这么做。
5楼2011-04-14 17:56:17
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yuyan225

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-04-14 17:56:17:
运气非常好的情况下可以!真核生物的基因是断裂基因,有内含子,你从基因组上直接扩增的好一般是含有内含子的,你克隆到载体上一般不能表达或者表达了也不是你要的东西。而cDNA不一样,是逆转录后剪接了的,只有 ...

最近正在头疼这个问题,非常感谢您,受教了~~
6楼2011-04-15 16:10:10
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)



yuyan225(金币+1): 谢谢参与
即使有内含子,同是丝状真菌,一般可以识别的。
7楼2012-07-11 13:00:33
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新乡小树

捐助贵宾 (正式写手)



yuyan225(金币+1): 谢谢参与
去掉了内含子,生物翻译蛋白都是从mRNA开始的不加内含子的序列。
8楼2014-03-22 00:10:42
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简单回复
liang88873楼
2011-04-14 16:37   回复  
yuyan225(金币+1):谢谢参与
祝福!
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