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yuyan225

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做真菌异源表达的表达序列是否可从基因组上扩

如题，最近即将开始做真菌异源表达，表达的基因也是来源于真菌，想问一下各位虫友，从基因组上扩的该片段能否连于表达载体，用于后续实验？（最近做的原核表达和酵母表达用的片段都是从cDNA上扩的，不知来源于基因组的片段与cDNA的片段用于表达，有何不同之处？望高手指点~~）
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1楼 2011-04-14 16:24:51
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1986

铁杆木虫 (知名作家)
★
yuyan225(金币+1):谢谢参与
这个我真不知道，碰巧过来，给你顶帖吧。
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2楼2011-04-14 16:36:06
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yuyan225

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 1986 at 2011-04-14 16:36:06:
这个我真不知道，碰巧过来，给你顶帖吧。

谢谢！
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4楼2011-04-14 17:01:12
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
yuyan225(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by yuyan225 at 2011-04-14 16:24:51:
如题，最近即将开始做真菌异源表达，表达的基因也是来源于真菌，想问一下各位虫友，从基因组上扩的该片段能否连于表达载体，用于后续实验？（最近做的原核表达和酵母表达用的片段都是从cDNA上扩的，不知来源于基因 ...

运气非常好的情况下可以！真核生物的基因是断裂基因，有内含子，你从基因组上直接扩增的好一般是含有内含子的，你克隆到载体上一般不能表达或者表达了也不是你要的东西。而cDNA不一样，是逆转录后剪接了的，只有编码序列，没有内含子
。所以你运气非常好的情况下，即扩增的基因正好没有内含子的情况下，可以这么做。
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5楼2011-04-14 17:56:17
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yuyan225

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-04-14 17:56:17:
运气非常好的情况下可以！真核生物的基因是断裂基因，有内含子，你从基因组上直接扩增的好一般是含有内含子的，你克隆到载体上一般不能表达或者表达了也不是你要的东西。而cDNA不一样，是逆转录后剪接了的，只有 ...

最近正在头疼这个问题，非常感谢您，受教了~~
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6楼2011-04-15 16:10:10
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
yuyan225(金币+1): 谢谢参与
即使有内含子，同是丝状真菌，一般可以识别的。
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7楼2012-07-11 13:00:33
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新乡小树

捐助贵宾 (正式写手)
★
yuyan225(金币+1): 谢谢参与
去掉了内含子，生物翻译蛋白都是从mRNA开始的不加内含子的序列。
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8楼2014-03-22 00:10:42
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liang88873楼
2011-04-14 16:37   回复  
yuyan225(金币+1):谢谢参与
祝福！
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