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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 快崩溃了，提个DNA 有这么难吗？
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分子结构

金虫 (小有名气)

[求助] 快崩溃了，提个DNA 有这么难吗？

各位师哥师姐师妹师弟，你们是否可以帮助小女子一下，我用天根的试剂盒提取真菌基因组DNA，一步步都是按照步骤来的，可是最后跑电泳却什么也没有，第一步我听从上一届师兄的建议，利用石英砂研磨的菌丝体，研磨的也很细致。但是最后结果真的让我快崩溃了。做分子的童鞋真的伤不起啊！
都做了半个月了，一遍遍的提取，我实在是对自己失望透顶了。关键是找不到原因。这就像是一个灵异事件，真的太鬼魅了！
感谢大家，小女子这厢有礼啦~
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永远不要为失去的感到遗憾——你没有摘到的，只是春天的一朵花，整个春天还是你的。
1楼2011-09-15 13:17:30
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, MicEPI+1, 应助指数+1, 的确是个问题 2014-07-21 17:50:31
引用回帖:
17楼: Originally posted by 暖暖ai at 2014-07-21 08:39:08
我没找到你说的那个贴，能不能给我发一下吖
...

小木虫有个很蠢的缺点，太久远的搜索不显示。

5）DNA抽提液的配置
表 2-5  DNA抽提液的配置
Table 2-5 The component of DNA distilling buffer
成分        浓度
NaCl        200mmol/L
EDTA-Na2        4mmol/L
SDS        2%
Tris-HCl(pH=8.0)        100mmol/L

2.2.5.2.1真菌总DNA的提取
（1）接种菌株至液体培养基中，28℃，180rpm振荡培养3天；
（2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体；
（3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状；
（4）将粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液；
（5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000rpm离心10min；
（6）取500µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）；
（7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30min；
（8）10000rpm 离心10min，沉淀物用75%乙醇洗2次后真空干燥；
（9）以20µL 1×TE 溶解沉淀物；
（10）电泳检测总DNA的浓度。
快崩溃了，提个DNA 有这么难吗？
图片1.jpg
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暖暖ai
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
18楼2014-07-21 13:03:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

maidmocha

铁杆木虫 (小有名气)
★
zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖交流^_^ 2011-10-16 10:13:21
建议使用CTAB & 液氮研磨法，得率和纯度都不错。注意一下低温的保持。其他的方法都很成熟。
个人认为，DNA与RNA的提取完全不需要试剂盒什么的。
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13楼2011-10-15 23:39:00
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普通回帖

AiHaibara

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wolfebst(金币+5): 鼓励新虫 2011-09-15 18:24:04
分子结构(金币+2): 2011-09-15 20:36:19
如果提基因组目的是做PCR可以考虑超声破碎菌体，然后酚氯仿抽提蛋白，再醇沉基因组DNA。
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2楼2011-09-15 13:28:37
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分子结构

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by AiHaibara at 2011-09-15 13:28:37:
如果提基因组目的是做PCR可以考虑超声破碎菌体，然后酚氯仿抽提蛋白，再醇沉基因组DNA。

会不会与上样缓冲液有关啊？
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3楼2011-09-15 14:06:20
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流^_^ 2011-10-10 04:13:55
天跟的产品伤不起啊，我用它的试剂盒来回收DNA，那个效率啊惨不忍睹。
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微生物发酵
4楼2011-09-15 15:30:22
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keke0812

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wolfebst(金币+5): 鼓励新虫 2011-09-15 18:24:20
分子结构(金币+2): 2011-09-15 20:35:27
分子结构(金币+6): 2011-10-10 16:11:29
真菌是挺难提的，我以前用试剂盒一直提不出来，后来用CTAB法手提，提出来了，要不你试试。另外用石英砂研磨好像是不行，你用液氮
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5楼2011-09-15 16:11:30
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分子结构

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by keke0812 at 2011-09-15 16:11:30:
真菌是挺难提的，我以前用试剂盒一直提不出来，后来用CTAB法手提，提出来了，要不你试试。另外用石英砂研磨好像是不行，你用液氮

嗯，我试一下，谢谢你
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6楼2011-09-15 20:35:07
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分子结构

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hkfgwww at 2011-09-15 15:30:22:
天跟的产品伤不起啊，我用它的试剂盒来回收DNA，那个效率啊惨不忍睹。

我觉得可能不怨试剂盒，因为试剂盒是我周三刚买的
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7楼2011-09-15 20:36:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
楼主极少上论坛，找一下我获得EPI 的回帖吧，就全明白了，我在这里就不说方法了，我不想要重复的EPI。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2011-09-15 22:47:34
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AiHaibara

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖交流^_^ 2011-10-16 10:12:53
引用回帖:
3楼: Originally posted by 分子结构 at 2011-09-15 14:06:20:
会不会与上样缓冲液有关啊？

应该与上样缓冲液关系不大，其实百分之五十的甘油也可以做上样缓冲液，只是少了溴酚蓝指示位置。
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9楼2011-09-16 08:36:13
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weekend883

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 感谢回帖 2011-10-10 04:14:22
用CTAB法提取，比较好提，要注意提取过程中的时间，不要太久了，久了容易断裂
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10楼2011-09-16 14:55:38
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