【答案】应助回帖

11楼2011-10-10 00:27:59

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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

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zhang8826857(金币+2): 鼓励积极回帖交流^_^鼓励新虫 2011-10-16 10:13:13

我前几天刚提了真菌的，是用手提的，加了石英砂，在漩涡震荡仪上振荡充分，提出来了。

12楼2011-10-15 18:40:21

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maidmocha

铁杆木虫 (小有名气)

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zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖交流^_^ 2011-10-16 10:13:21

建议使用CTAB & 液氮研磨法，得率和纯度都不错。注意一下低温的保持。其他的方法都很成熟。
个人认为，DNA与RNA的提取完全不需要试剂盒什么的。

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13楼2011-10-15 23:39:00

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doublehelix

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zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖 2011-10-16 15:03:21

真菌是挺难提的，我以前用氯化苄法，DNA完全可满足分子生物学的需要

14楼2011-10-16 14:08:36

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匿名

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15楼2011-10-18 14:23:27

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julin1002

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我们在跑电泳时用的是TAE缓冲液，用EB染色

16楼2012-05-11 19:32:29

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暖暖ai

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8楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-09-15 22:47:34
楼主极少上论坛，找一下我获得EPI 的回帖吧，就全明白了，我在这里就不说方法了，我不想要重复的EPI。

我没找到你说的那个贴，能不能给我发一下吖

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

17楼2014-07-21 08:39:08

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冼亮淀粉酶

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silicare: 金币+5, MicEPI+1, 应助指数+1, 的确是个问题 2014-07-21 17:50:31

引用回帖:

17楼: Originally posted by 暖暖ai at 2014-07-21 08:39:08
我没找到你说的那个贴，能不能给我发一下吖
...

小木虫有个很蠢的缺点，太久远的搜索不显示。

5）DNA抽提液的配置
表 2-5 DNA抽提液的配置
Table 2-5 The component of DNA distilling buffer
成分浓度
NaCl 200mmol/L
EDTA-Na2 4mmol/L
SDS 2%
Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L

2.2.5.2.1真菌总DNA的提取
（1）接种菌株至液体培养基中，28℃，180rpm振荡培养3天；
（2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体；
（3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状；
（4）将粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液；
（5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000rpm离心10min；
（6）取500µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）；
（7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30min；
（8）10000rpm 离心10min，沉淀物用75%乙醇洗2次后真空干燥；
（9）以20µL 1×TE 溶解沉淀物；
（10）电泳检测总DNA的浓度。

图片1.jpg

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暖暖ai

流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。

18楼2014-07-21 13:03:46

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暖暖ai

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引用回帖:

18楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-07-21 13:03:46
小木虫有个很蠢的缺点，太久远的搜索不显示。

5）DNA抽提液的配置
表 2-5 DNA抽提液的配置
Table 2-5 The component of DNA distilling buffer
成分浓度
NaCl 200mmol/L
EDTA-Na2 4mmol/L
SDS 2%
Tris ...

谢谢你。有不懂的还会麻烦你的！