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金虫 (小有名气)

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[求助] 快崩溃了，提个DNA 有这么难吗？

各位师哥师姐师妹师弟，你们是否可以帮助小女子一下，我用天根的试剂盒提取真菌基因组DNA，一步步都是按照步骤来的，可是最后跑电泳却什么也没有

，第一步我听从上一届师兄的建议，利用石英砂研磨的菌丝体，研磨的也很细致。但是最后结果真的让我快崩溃了。做分子的童鞋真的伤不起啊！

都做了半个月了，一遍遍的提取，我实在是对自己失望透顶了。关键是找不到原因。这就像是一个灵异事件，真的太鬼魅了！
感谢大家，小女子这厢有礼啦~

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永远不要为失去的感到遗憾——你没有摘到的，只是春天的一朵花，整个春天还是你的。

1楼2011-09-15 13:17:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, MicEPI+1, 应助指数+1, 的确是个问题 2014-07-21 17:50:31

引用回帖:

17楼: Originally posted by 暖暖ai at 2014-07-21 08:39:08
我没找到你说的那个贴，能不能给我发一下吖
...

小木虫有个很蠢的缺点，太久远的搜索不显示。

5）DNA抽提液的配置
表 2-5 DNA抽提液的配置
Table 2-5 The component of DNA distilling buffer
成分浓度
NaCl 200mmol/L
EDTA-Na2 4mmol/L
SDS 2%
Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L

2.2.5.2.1真菌总DNA的提取
（1）接种菌株至液体培养基中，28℃，180rpm振荡培养3天；
（2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体；
（3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状；
（4）将粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液；
（5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000rpm离心10min；
（6）取500µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）；
（7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30min；
（8）10000rpm 离心10min，沉淀物用75%乙醇洗2次后真空干燥；
（9）以20µL 1×TE 溶解沉淀物；
（10）电泳检测总DNA的浓度。