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快崩溃了，提个DNA 有这么难吗？
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 各位师哥师姐师妹师弟，你们是否可以帮助小女子一下，我用天根的试剂盒提取真菌基因组DNA，一步步都是按照步骤来的，可是最后跑电泳却什么也没有 ，第一步我听从上一届师兄的建议，利用石英砂研磨的菌丝体，研磨的也很细致。但是最后结果真的让我快崩溃了。做分子的童鞋真的伤不起啊！ 都做了半个月了，一遍遍的提取，我实在是对自己失望透顶了。关键是找不到原因。这就像是一个灵异事件，真的太鬼魅了！ 感谢大家，小女子这厢有礼啦~  |
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13楼2011-10-15 23:39:00
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【答案】应助回帖
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silicare: 金币+5, MicEPI+1, 应助指数+1, 的确是个问题 2014-07-21 17:50:31
silicare: 金币+5, MicEPI+1, 应助指数+1, 的确是个问题 2014-07-21 17:50:31
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小木虫有个很蠢的缺点，太久远的搜索不显示。 5）DNA抽提液的配置 表 2-5 DNA抽提液的配置 Table 2-5 The component of DNA distilling buffer 成分 浓度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L 2.2.5.2.1真菌总DNA的提取 （1）接种菌株至液体培养基中，28℃，180rpm振荡培养3天； （2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体； （3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状； （4）将粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液； （5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000rpm离心10min； （6）取500µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）； （7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30min； （8）10000rpm 离心10min，沉淀物用75%乙醇洗2次后真空干燥； （9）以20µL 1×TE 溶解沉淀物； （10）电泳检测总DNA的浓度。  图片1.jpg |
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暖暖ai18楼2014-07-21 13:03:46
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