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dreamswing

木虫 (小有名气)

[求助] 环状基因组的PCR

各位高手,环状的基因组DNA做PCR要不要酶切之后在做PCR,这个基因组比较大,约有770k,而且GC含量较高。此外还有什么其他注意事项,望得到大家指导
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖


amisking(金币+1): 鼓励积极应助! 2011-11-25 18:40:37
切开来做PCR比环状的时候扩增效率要高。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-11-25 17:55:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 同意,我一般也不酶切! 2011-11-25 21:29:23
个人觉得没必要切开吧,我就经常用环状质粒当模板扩增,基本不存在什么问题。大肠杆菌基因组也是个环状的,扩增时稀释下梯度扩增也没有什么问题。
如果你真要切开的话,怎么用酶也是个问题。
另外,个人认为还是先设计引物扩增试试吧,做之前做好充分准备是对的,但也不要没做就担心很多问题。
Thank-you,so-blue.
3楼2011-11-25 18:47:49
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foreverjohn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主用神马方法能提取到完整的未断裂的环状基因组,据我所知,一般的提取方法得到肯定是断裂的基因组,所以根本无所谓环状了,并且酶切选得不好,在你的片段上正好有切点,就可能扩不出来了,其实基因组上扩增基因很容易的,关键是引物设计,可以先扩增比目的片段长一点的,然后再用引物扩增目的片段。
4楼2011-11-27 12:34:07
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xuwei119

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

细菌不都是环状基因组么,菌落PCR都做了,还切什么啊
5楼2011-11-30 15:05:06
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