应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 环状基因组的PCR
51/1返回列表
查看: 1432  |  回复: 4
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者dreamswing将赠送您 2 个金币

dreamswing

木虫 (小有名气)

[求助] 环状基因组的PCR

各位高手，环状的基因组DNA做PCR要不要酶切之后在做PCR，这个基因组比较大，约有770k,而且GC含量较高。此外还有什么其他注意事项，望得到大家指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
宁静以致远
1楼2011-11-25 17:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励积极应助！ 2011-11-25 18:40:37
切开来做PCR比环状的时候扩增效率要高。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-11-25 17:55:01
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 同意，我一般也不酶切！ 2011-11-25 21:29:23
个人觉得没必要切开吧，我就经常用环状质粒当模板扩增，基本不存在什么问题。大肠杆菌基因组也是个环状的，扩增时稀释下梯度扩增也没有什么问题。
如果你真要切开的话，怎么用酶也是个问题。
另外，个人认为还是先设计引物扩增试试吧，做之前做好充分准备是对的，但也不要没做就担心很多问题。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
3楼2011-11-25 18:47:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foreverjohn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主用神马方法能提取到完整的未断裂的环状基因组，据我所知，一般的提取方法得到肯定是断裂的基因组，所以根本无所谓环状了，并且酶切选得不好，在你的片段上正好有切点，就可能扩不出来了，其实基因组上扩增基因很容易的，关键是引物设计，可以先扩增比目的片段长一点的，然后再用引物扩增目的片段。
赞一下 回复此楼
4楼2011-11-27 12:34:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuwei119

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

细菌不都是环状基因组么，菌落PCR都做了，还切什么啊
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-11-30 15:05:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dreamswing 的主题更新
51/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 SCI英文润色翻译-EnPapers美团队-先修改后付款
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 试用期辞职 +10 ZHONGWU_U 2024-06-18 16/800 2024-06-20 11:52 by xiang104
[基金申请] 青年基金会评专家到底是怎么会评的呀？主审专家是不是一般不会改动系统按函评给的顺序 5+4 他山攻玉之石 2024-06-18 16/800 2024-06-20 11:14 by 阿凡达C
[论文投稿] 投稿求助 +3 平凡的日子 2024-06-19 4/200 2024-06-20 11:05 by 平凡的日子
[基金申请] 工材口青年基金上会可能性 +8 今晚推荐22 2024-06-19 10/500 2024-06-20 11:00 by 手心里的幸福
[基金申请] 太卷了 +14 laoyuefubio 2024-06-17 27/1350 2024-06-20 09:52 by htjwqy
[论文投稿] 投稿求助 6+3 小短腿安琪拉 2024-06-19 3/150 2024-06-20 08:59 by nono2009
[找工作] 药学硕士找不到工作，打算去做科研助理了 +9 pom戴墨镜 2024-06-14 22/1100 2024-06-20 05:47 by 投必得科研顾问
[海外博后] 墨尔本大学博后offer要不要接 +3 kyxblmm 2024-06-18 3/150 2024-06-19 22:39 by blake1111
[访问学者] 国家公派访问学者申请结果出了吗？ +4 65syn 2024-06-13 4/200 2024-06-19 16:40 by 海洋之心168
[论文投稿] ACS AMI 返回审稿意见，一个大修，两个据稿，编辑给的修改重投 +5 智商已更新 2024-06-19 5/250 2024-06-19 12:35 by nono2009
[基金申请] 我标书代码变了 +62 学员NHuqdk 2024-06-16 85/4250 2024-06-19 11:52 by zhangjxnu
[找工作] 初始合伙人来啦！（生物试剂耗材标准品） +14 欢快的小科研人 2024-06-15 25/1250 2024-06-18 20:35 by 小飞来虫
[教师之家] 请问事业编制和年薪制冲突吗？ +12 ZHONGWU_U 2024-06-14 12/600 2024-06-18 19:31 by fangyl2005
[有机交流] 求教最后一步问题出在哪 20+3 苏州浩恒 2024-06-15 4/200 2024-06-18 08:33 by like_2005
[基金申请] 面青地会评时间 +8 tanjydd 2024-06-15 8/400 2024-06-17 17:08 by 小龙虾2008
[基金申请] 博后基金，博管会会提前知道消息吗？ +4 yuyiang 2024-06-13 4/200 2024-06-16 11:40 by yangyuzhong4
[基金申请] 博士后创新人才支持计划公示 +9 aishida144 2024-06-14 15/750 2024-06-16 09:52 by msjy
[论文投稿] 投稿被一个审稿人恶意评审了怎么样？ +5 1chen 2024-06-14 7/350 2024-06-15 23:15 by xy66xy
[基金申请] E12面上申请 +4 汉风之遗 2024-06-13 4/200 2024-06-14 15:28 by 天外飞去来
[有机交流] ππ堆积会发生在有机溶剂中吗 5+3 zibuyu0420 2024-06-13 4/200 2024-06-14 14:17 by 小肉干
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭