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werty1245

新虫 (初入文坛)

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[求助] 总是提不出来细菌基因组DNA 已有1人参与

最近一直手提屎肠球菌的基因组DNA，开始用的是6μl 50mg/ml溶菌酶，37℃3h；10%SDS和蛋白酶K，55℃2h；5M NaCl；酚氯仿异戊醇抽提两次；2倍体积无水乙醇洗脱；75%酒精洗涤，离心，烘干。一直提不出来，后来又用CTAB/NaCl法，也没提出来，谁提出来过，教教我~~~
小妹不胜感激~~~

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1楼 2013-06-09 10:16:09

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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-09 21:53:14
gyesang: 回帖置顶 2013-06-10 16:56:31

保证提取过程中每一步准备到位。我没提过细菌的，提的都是木本的组织，用的是异硫氰酸胍法，细菌理论上是比较好提的，
1 注意用量要足够
2 注意试剂及试剂配制没有问题
3 注意操作要细心，细菌蛋白含量应该比较多吧，可以结合氯仿多抽几次，提一点，酚氯仿是自己配的吗？注意要用Tris饱和酚
4 可以买个试剂盒试试。
5 提完不要只跑电泳，要去测纯度和浓度去发现问题，比如是否蛋白含量过高，杂质过多影响电泳观察，这完全是可能的，还有是否因为染料过期问题影响观察等等。
每一步都要注意，多总结，多观察。