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[交流]
基因组DNA提取结果
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从一开始做分子生物学实验，心中就有一个疑问：按照PROTOCOL提取出的DNA，电泳后呈现的条带数量，会不会正好就是染色体的数量。后来知道，DNA提取受到很多方面影响，提取出的DNA已经受到一定程度损伤，因此条带数目不确定。如图，图一显示的两种不同微藻的DNA提取结果。一般情况下，按照我实验室现有PROTOCOL提取出的DNA如右泳道所示，有一条几KB的条带同时带有拖尾。左边泳道未见条带，仅有拖尾，属于此次实验的特殊情况，该微藻之前DNA提取结果亦同右泳道。然而，用通用引物对其进行PCR，结果如图二，都得到了较好的结果。 我不是在此讨论我的实验结果，只是想和大家研究讨论下DNA提取结果是什么样子，其受什么条件影响。在以前的实验室，用另一份PROTOCOL，电泳结果往往是几条几百BP和一两条上千BP的条带；而现在的PROTOCOL却带来了图示结果。我想知道，到底是否是PROTOCOL影响了DNA的提取结果。如果是，为什么有图一这样的结果；如果不是，为什么用不同PROTOCOL，同一种微藻提取出的电泳结果不同？是否还有其他影响因素？ 欢迎大家讨论交流，同时希望把你们的电泳结果发到这里来给各位看一下。 PS:为什么好的RNA提取结果往往是电泳时看到三条清楚的条带？无论什么方法都这样吗？  gDNA  PCR |
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leon198418029(金币+1): 谢谢参与
leon198418029(金币+1): 谢谢参与
| 基因组DNA提取的时候即使很小心，也是被shear成十几K-几十K的片段的。不可能提出几M或者几十M大小的完整分子。你说的不同的方法不知道是哪里不同。我觉得主要的区别是操作中的机械力和杂质清除是否完全。一般提出来比较干净的DNA是会看到一条大于10K的带。你说的几百bp可能是没有完全降解掉的RNA。至于PCR的结果，因为机械力作用下DNA的断裂是随机的，如果DNA不是弄得太碎了，都应该可以P出来，所以你的两个样品都有扩增。当然断裂少的样品效果会更好一些。 |
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leon1984180296楼2013-01-14 03:00:37
2楼2013-01-13 17:35:23
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10楼2013-01-14 15:11:42
11楼2013-01-14 19:40:14
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leon198418029(金币+1): 谢谢参与
leon198418029(金币+1): 谢谢参与
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虫友们好！初来咋到，还请多多关照。 我正用CTAB法提取柳杉的dna，但是最后用70%酒精洗涤俩次后仍然量很多，但是用去跑PCR时，没结果。 我的方法是：1，油液氮研磨成粉末，转到加油STE的离心管中，充分摇匀，离心10分钟，去上清留沉淀。加热好的CTAB水浴30分钟，中间摇匀5-8次 2.离心10min，汲取上清液，加等体积的氯仿异戊醇洗涤，（重复操作直至分层没有蛋白层） 3，2/3体积的冷异丙醇沉淀30min 4.70%抽提俩次 5.通风处催干 6.加30ul的TE溶解 在提取过程中，STE洗涤时糖分很多，不知道是不是糖分没去干净，还是怎么的，就是提不出来DNA，还请各位多多指教，万分感谢! |
12楼2013-01-17 20:32:28
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14楼2013-01-18 09:34:39
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16楼2013-01-18 09:53:22
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hi_20123楼
2013-01-13 17:38
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leon198418029(金币+1): 谢谢参与
nlbtr4楼
2013-01-13 18:23
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duanepp9楼
2013-01-14 13:13
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ziyanqiuqian17楼
2013-05-24 12:23
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